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标题:[求助]有做小鼠原代肝细胞培养的吗

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发表于 2012-5-30 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]有做小鼠原代肝细胞培养的吗



大家好 我最近在做原代小鼠肝细胞的培养 查了很多资料 还是没有什么头绪
做了一次组织块法的 表明上看起来像是养起来了 但是细胞密密麻麻的挤在一起 都分不清是不是肝细胞 也不知道有没有污染
我现在打算用酶消化法做 有做过培养的朋友们吗 望赐教
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发表于 2012-5-30 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对了 弱弱的顺便问一句 不知道这种小鼠或是大鼠的原代肝细胞会不会有卖的 (*^__^*) 嘻嘻……
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发表于 2012-5-30 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知你用的什么培养基？最好用RPMI1640，10%FBS，会好很多，如果没有用DMEM-low glucose，10%FBS也可以，但传代后细胞状态会比较差。
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发表于 2012-5-30 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好 是DMEM-low glucose会好一些吗 能把你的联系方式告诉我吗 好像请教一下 呵呵
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发表于 2012-5-30 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMEM-low glucose比high好一些，但传代后可能细胞状态会越来越差，最好用RPMI1640，10%FBS，对于内胚层来源的细胞比较适用。另外，不知你在取材时怎么处理和消化细胞的，怎么消毒，多长时间，用什么酶消化的，多少浓度，作用时间等等都会影响到细胞状态。可以发张你培养的细胞照片到我信箱，我们共同研究
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发表于 2012-5-30 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢你拉 是这样的 我只是做过一次组织块法的 但是结果不好 我现在是想用消化法做 还没开始做呢 呵呵 我现在是想看看别人都是怎么做的 blue_150谢谢你哦 能把你的邮箱告诉我吗 呵呵 我还有很多事情想请教你 我是用成年小鼠做 而且不大鼠灌流 就是把肝脏直接取下来消化 不知道你这样做过没 要是你有步骤的话能给我看看吗 谢谢拉
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发表于 2012-5-30 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
无菌下取肝脏，机械分离组织成1*1mm大小，尽量不要分离到肝内胆管或血管及纤连组织，否则会造成成纤维细胞污染。
0.1-0.2%四型胶原酶37度轻摇床中消化45-60mins，每10分钟观察一次。
过滤——离心——接种于RPMI1640，10%FBS培养基，12—20hour后换液,如果取材时红细胞过多，可用红细胞裂解液处理。
小鼠的组织较人的娇嫩，消化时间要掌握好。
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发表于 2012-5-30 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是一周内的乳鼠的肝脏，然后用0.4%Ⅳ型胶原酶消化，每次水浴10min，吸取上清夜，一共消化4次，吸取的上清夜放入冰箱中，终止消化
长时间的用胶原酶消化会影响细胞活性
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发表于 2012-5-30 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

偷偷问一个很弱智的问题：为什么看文献有的肝原代细胞的分离需要用灌流的方法，而有的则直接把肝剪成小碎块？再问个更外行的话：小鼠肝原代细胞如果只培养1-3天时间，能不能悬浮培养而不贴壁培养呀？各位看了别把我踢出去，真心求教，谢谢！
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 小中大
一般大鼠成年的是用灌流法的 有的成年小鼠也用 剪成小碎块的是用于乳鼠 因为肝脏太小哦 还有肝细胞一般就是贴壁长的吧 好像不能悬浮哦
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