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标题:293细胞 质粒转染老是转不进

maicaixiaogu[使用道具]
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293细胞 质粒转染老是转不进

质粒在几千大小 转293细胞 用lipo2000

而且脂质体在4微升以上 细胞就死亡

已经转了好几次了 而且用了很多浓度进行摸条件 还是不行 没有荧光

讨教前辈的指点!!!
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huihuidetian112[使用道具]
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2
 
可能有如下原因:

1。2000的毒性是很大,但效率还算可以,如果影响实验的话建议换其他脂质体,罗氏的脂质体是很不错的,可以考虑;

2。转染不进去,或是转染效率低,个人认为质粒与脂质体比例很重要,LZ有没有测浓度,有没有准确稀释,时间长浓度会不会变。。。这些问题都需要LZ考虑,浓度差一点,比例变了,对转染效率的影响是很大的;

3。LZ摸的是脂质体浓度么?个人认为意义不大,脂质体都是商业化的产品,照说明书上的比例做应该问题不大;

最后,没有荧光还是荧光很低,如果为了确定质粒有没有转入,建议你设计一段LUC引物做一下PCR,这样就能确定你有没有转进去还是因为检测的问题,如果换脂质体后转染效率依然很低,那就说明这个细胞不使用这种+-电荷结合的脂质体,可以考虑电转。应该问题不大,再试试吧!
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