淀粉的测定——酶水解法(一)

关键词:标准微粒
食品检测
环保标准样品
无机标准样品

1.原理

样品经除去脂肪和可溶性糖类后,在淀粉酶的作用下,使淀粉水解为麦芽糖和低分子糊精,再用盐酸进一步水解为葡萄糖,然后按还原糖测定法测定其还原糖含量,并折算成淀粉含量。

因为淀粉酶有严格的选择性、它只水解淀粉而不会水解其他多糖,水解后通过过滤可除去
其他多糖。所以该法不受半纤维素、多缩戊糖、果胶质等多糖的干扰,适合于多糖含量高的样品,分析结果准确可靠,但操作复杂费时。

2.仪器
    ①回流冷凝管。
    ②水浴锅。

3.试剂
    ①乙醚。
    ②85%乙醇。
    ③0.5%淀粉酶溶液:称取0.5 g淀粉酶,加100 mL水溶解,加入数滴甲苯或三氯甲烷(防止长霉),贮存于冰箱冷藏室中(最好现配现用)。
    ④碘溶液:称取3.6 g碘化钾溶于20 mL。水中,加入1.3 g碘,溶解后加水稀释到100mL。

其余同蔗糖的测定。

4.测定步骤
    ①样品处理:称取2~5 g样品(含淀粉0.5 g左右),置于铺有折叠滤纸的漏斗内,先用50 mL乙醚分5次洗涤以除去脂肪(如样品脂肪含量少,此步骤可免)。再用约100 mL85%的乙醇分次洗去可溶性糖类。将残渣移至250 mL烧杯中,用50 mL水洗涤滤纸和漏斗,洗液并人烧杯内。
    ②酶水解:将烧杯置沸水浴上加热15 min,使淀粉糊化,放冷至60℃以下,加入20 mL.,淀粉酶溶液,在55~60℃保温1 h,并不时搅拌。然后取1滴此液于白色点滴板上,加1滴碘液应不呈蓝色,若呈蓝色,再加热糊化,冷却至60℃以下,再加20 mL淀粉酶溶液,继续保温,直至酶解液加碘液后不呈蓝色为止,加热至沸使酶失活,冷却后移入250 mL容量瓶中,加水定容。混匀后过滤,弃去初滤液,收集滤液备用。
    ③酸水解:取50 mL上述滤液于250 mL锥形瓶中,加5 mL6  mol·L-1盐酸,装上回流装置,在沸水浴中回流1 h,冷却后加2滴甲基红指示剂,用5  mol·L-1氢氧化钠溶液中和至红色刚好消失。把溶液移入100
mL容量瓶中,洗涤锥形瓶,洗液并人l00 mL容量瓶中,加水定容,摇匀,供测定用。
    ④测定:按还原糖测定法的高锰酸钾法或直接滴定法进行。同时取50 mL水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液,按同一方法做试剂空白试验。

5.计算

同酸水解法。

6.说明

    ①淀粉粒具有晶格结构,淀粉酶难以作用。加热糊化破坏了淀粉的晶格结构,使其易于被淀粉酶作用。
    ②使用淀粉酶前,应确定其活力及水解时加入量。可用已知浓度的淀粉溶液少许,加入一定量淀粉酶溶液,置55~60℃水浴中保温1 h,用碘液检验淀粉是否水解完全。以确定酶的活力及水解时的用量。