【求助】2-DE第二向电泳时间

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标题:【求助】2-DE第二向电泳时间

toy[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用13CM的胶,我跑第二向电泳的时间以前是4-5小时,现在为什么变成3个半小时?条件都没有变化,不知道为什么呢?这个与温度有关系么?有没有人遇到这个问题呢?

fox_79[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

与上下槽密封是否严密有关，如果密封不好，时间延长，否则相反。

BOSS2011[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

以前遇到过这样的现象，是由于制胶液中1.5MTris-Cl pH值变化所致。
建议重配新鲜的。
如果胶的pH偏碱，就会跑的快，偏酸，就会跑的慢。
当然，温度高，也会跑的快。但一般都有循环控温装置，温度变化不会很大的。
祝实验顺利。

abc816[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是由于制胶液中1.5MTris-Cl pH值变化所致。
pH值受温度影响很大, 会随温度的升高而降低。也就是说,以前所配的1.5MTris-Cl pH值是8.8, 但现在天气热了,室温升高后, 虽然 pH计显示的是8.8, 但实际的pH值会高于8.8(偏碱)。
如果胶的pH偏碱，溴酚蓝前沿就会跑的快，感觉第二向电泳的时间会缩短,但染色后会发现, 蛋白点没有跑开, 整块胶的蛋白点聚集在胶的偏上方。
我前段时间天气变热后就遇到过这种情况。后来将配好的1.5MTris-Cl 先放在4度冰箱一段时间,再调pH值, 就发现问题解决了。
建议调pH值时要注意温度的变化。
祝实验顺利!

glass[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 abc816 于 2014-4-17 16:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
是由于制胶液中1.5MTris-Cl pH值变化所致。
pH值受温度影响很大, 会随温度的升高而降低。也就是说,以前所配的1.5MTris-Cl pH值是8.8, 但现在天气热了,室温升高后, 虽然 pH计显示的是8.8, 但实际的pH值会高于8.8(偏碱 ...

楼上的说得很对, 温度对pH值确实有影响。
此外关于酸碱性对跑胶速度的影响，我写反了，又仔细想了一当时的实验结果，已在上贴修改。谢谢。

toy[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢大家了，
我也发现溴芬兰跑的比较快，结果蛋白质点都集中在胶的上半部，没有分离开．
我重新配一下Ｔris-HCl试试看．

abc816[使用道具]
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发表于 2014-4-17 16:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位战友，大家好！
我的问题是：之前跑二向（PH3-10NL，17cm）一直是很稳定的5:30Hr，从来没出过任何问题。可忽然有一次换了电泳缓冲液之后就变成7:30～8:00小时了，其他试剂都没变过，只有电泳缓冲液是新配的，包括外槽的都换掉了，之后再怎么配电泳缓冲液都回不去5:30了，这样子的结果是电泳时间太长，自来水冷却系统因为天气热的原因冷却效果不好（跑胶时室内空调开到22度也不起作用），导致胶在6:00之后从胶的下方开始出现气泡，溴酚蓝和蛋白点都跑的乱七八糟的...玻璃板取下来之后手摸上去是温的...撬掉玻璃板胶的下半部分都有点干干的感觉...
分析起来应该是跑的时间太久了导致胶要干掉了，并且因为胶要被烤干了又导致胶跟玻璃板之间有气泡出现（只是很奇怪这个气泡不知从哪里进去的，因为整个系统是密闭的...）
看了大家的经验，以为是我的1.5MTrisCl出问题了，可刚才从冰箱取出我的Tris测了一下，PH并没有变化，还是8.8,所以不知道问题又出在哪里了？
另外，不知道大家用伯乐二向槽的在夏天是怎么冷却的，就自来水么？自来水的温度有近30度呢...
期待大侠们帮我分析一下到底时间延长以及出现气泡是怎么回事该怎么解决吧，多谢先！

avi317[使用道具]
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发表于 2014-4-18 15:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电泳缓冲液中的SDS含量没有变化？

循环水浴选择能够降温制冷的，设置为15-20度即可。

toy[使用道具]
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发表于 2014-4-18 15:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 avi317 于 2014-4-18 15:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

电泳缓冲液中的SDS含量没有变化？

循环水浴选择能够降温制冷的，设置为15-20度即可。

电泳缓冲液没有变化成分和浓度Gly7.5g，Tris1.5g，SDS0.5g配成500ml为1×电泳缓冲液，一直都是这个配方没有变过。
现在已经有的仪器就是biorad的，他只能自来水冷却，没有自带的冷却装置啊...