[求助]脐静脉内皮细胞培养

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标题:[求助]脐静脉内皮细胞培养

33号[使用道具]
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发表于 2012-5-21 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用I型胶原酶，37度，10分钟。酶是用的sigma的。每次消化下的细胞数目不多，总是不太够，细胞长长就死了。本周连作两天，消化下的细胞团总是很少，既便有内皮细胞长出，长的也不好，根本长不成菊花样散开就慢慢死掉了。郁闷。请高人给指点指点。（上周同样条件，碰巧一瓶长的不错，细胞开始融合了，以后就再也不行啦）

eric930[使用道具]
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发表于 2012-5-21 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不要使用大的培養瓶　改用小的培養瓶試試看

yes4[使用道具]
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发表于 2012-5-21 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，楼主，你可以换用Ⅱ型胶原酶试试，还可以适当延长消化的时间，因为胶原酶比较温和，不会轻易杀死细胞的。还有，正如楼上所说，如果消化下来的细胞太少，你可以用小瓶，甚至是24孔板来养，从而提高细胞密度，加快细胞生长。另外，原代的内皮细胞传代次数有限，一般情况下，最多也就传10代左右，传4～5代时，就会出现状态不好现象。

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-5-21 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用什么培养基？

yes4[使用道具]
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发表于 2012-5-21 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般来说，养内皮细胞用M199，但我的经验用1640或是高糖DMEM都可以。

33号[使用道具]
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发表于 2012-5-21 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位，我用的是25CM2 的培养瓶。用的是1640，完全培养液的成分：10%胎牛血清；10%人AB血清；内皮细胞生长因子；L-谷氨酰胺；双抗；1640。我养了近1个多月了，就是我上周的那瓶养的不错。但是后来一样的程序，再也重复不出。是否和季节有关系。还是与脐带本身有关？现在陷入瓶颈啦！再有，请问各位前辈，季节对养内皮的关系很大么？如果是季节的关系，是否冬天更差？是否应停一段时间，等到秋天？因毕业所迫，心里很是没底。