小中大[求助]我培养的神经元为什么没有突起啊?
各位老师:我最近在做新生鼠皮层神经元培养,已经培养第7天了,为什么突起还是不明显啊?我用的培养基是Neurobasal+2%B27+0.5mmol/L的L-谷氨酰胺+100U/ml的青链霉素。具体培养过程如下:取出生一天的新生鼠4只,75%酒精消毒1-2分钟,断头取脑,体视显微镜下剥离脑膜,小心剥离皮层,至小烧杯中剪碎成1mm3左右大小的小块,加0.25%胰酶15ml,37度培养箱中消化15分钟,中途拿出吹打几次,用含10%胎牛血清的DMEM完全培养基终止消化,1500转离心5分钟,弃上清液,10ml的DMEM完全培养基清洗一次,轻轻吹打2-3次,再次离心(1500转离心5分钟),弃上清液,加入10mlNeurobasal+2%B27+0.5mmol/L的L-谷氨酰胺+100U/ml的青链霉素的全培养基,轻轻吹打10-15次,200目滤网过滤,计数(因计数板当时不是太干净,计数不是太好),接种在培养瓶中(事先0.01%L-多聚赖氨酸包被过夜),3天后半量换液,以后每3天半换一次。培养24小时后,细胞呈圆形,折光性还可以,细胞密度也行。近几天,我看了下,细胞还是圆形,突起不明显,细胞状态也不少太好,个别有要飘起的迹象。以下,是我培养第7天皮层神经元细胞照片(400*)。请各位老师指导下啊,已经培养第7天了,为什么突起还是不明显啊?谢了啊!