小中大

免疫透射比浊法测定前白蛋白（一）

关键词：证书标准物质  食品成分检测  食品农药残留检测  蔬菜农药残留检测
  【实验原理】
  当抗体(即抗PA)过量且浓度固定时，抗体与被测抗原(PA)反应所形成的免疫复合物的量与吸光度值成正比，即与样品中PA量成正比。
  【试剂与器材】
    1．20mmol／L磷酸盐缓冲液(pH 7．4)。
    2．50g／L。聚乙二醇(PEG)-6000溶液称取5g PEG-6000，NaN3 100mg，用20mmol／L。磷酸盐缓冲液(pH 7．4)溶解，并加至100ml刻度，混匀，4℃保存。
    3．样品稀释液取20mmol／L，磷酸盐缓冲液(pH 7．4)100ml，加Brij-35 30mg溶解后于4℃保存。
    4．前白蛋白抗血清(抗PA)应用液抗PA(效价1：60)lml加50g／L，．PEG溶液5．0ml，混匀，4℃放置24小时，3000r／min离心30分钟，弃沉淀，上清液为抗PA应用液。
    5．PA参考血清  PA参考血清复溶后，用样品稀释液稀释成相当于原血清PA浓度0．05g／L、0．10g/L、0．20g／L、0．30g／L0．40g／L。
    6．自动生化分析仪
  【操作步骤】
  1．自动生化仪主要分析参数  方法类型：终点法；反应温度：37℃；波长：340nm；比色皿光径lcm；样品量：4倍稀释血清40μl；PA参考品：设0．05g／L、0．1g／L、0．2g／L、0．3g／L和0．4g／L 5种浓度，其4倍稀释度各40g/L；6倍稀释抗PA量：2501μl；20mmol／L磷酸盐缓冲液(pH 7．4)量：30μl；开始读数时间：90秒，最终读数时间：270秒；读数间隔时间：10秒；样品空白：定时空白方式(抗原抗体混合后6秒和反应平衡后各读一次A340。具体情况参照所用仪器参数设置要求和操作程序进行测定。
2．手工、半自动生化分析仪操作步骤
混匀，置37℃保温10分钟，波长340nm，以空白管调零，读取各管吸光度。
【结果计算】
    PA含量（mg／L)=测定管吸光度/标准管吸光度×标准管液浓度
【参考区间】
    健康成人血清前白蛋白浓度为250～400mg／L，儿童约为成人水平的一半，青春期则急剧增加达成人水平。散射比浊法结果稍低，为160～350mg/L。各单位建立本实验室参考值。