小中大【求助】梯度洗脱出现鬼峰
大家好,我在用甲醇-水做梯度洗脱时,一直有一个平头的鬼峰出现,现在排查了很多原因,都找不出问题所在,请教大家是否遇到过此类问题,麻烦给予指教。
我用的梯度是:
甲醇-水
0min 73 27
30min 73 27
40min 90 10
60min 90 10
流速:0.8ml/min 柱温:30度
在50min左右一直有一个峰高2~3mAu,面积100多的平头鬼峰
1.怀疑是试剂问题,将之前用的国产甲醇和实验室自制去离子水————换为:进口J.T.BAKER甲醇,娃哈哈纯净水,屈臣氏蒸馏水,鬼峰仍出现;
2.换一根柱子,鬼峰仍出现;
3.换机器(将Agilent换成waters),仍有鬼峰,只不过形状变成尖峰;
4.甲醇-水(90:10)等度洗脱,无鬼峰出现;
4.将柱子换为两通,梯度洗脱,无鬼峰出现;
5.将甲醇换为乙腈,同样的梯度同样的柱子,无鬼峰出现;
6.另外排除进样阀污染的原因,因为在以上实验过程中都没有进样,走的空白针。
PS:我现在做的样品只有用甲醇有比较好的分离效果,不能换用乙腈及其它试剂~
昨天打电话咨询了Agilent的工程师,工程师的意见是:猜测可能是水中杂质吸附在柱头,高比例甲醇时被冲洗出来;另外乙腈可能不能洗脱该杂质;而等度洗脱和用两通时,杂质不会被吸附;
今天和几个老师讨论了这个问题,有个老师的意见是有没有可能是梯度洗脱方法问题,从高比例的甲醇到更高比例的甲醇造成~请教有没有做梯度洗脱的朋友有类似的经验~感谢大家~
PS:现在做的是一个有关物质的方法,主峰在20多分钟出峰,用梯度洗脱的原因是大多数中间体是在主峰后面出峰,其中有一个中间体在该梯度方法中要到57min才出峰,也就是出峰是在鬼峰之后。