小中大[求助]关于始终存在的非特异扩增
[求助]关于始终存在的非特异扩增
大家好!我有一头疼的问题。我的目的片段210bp,但我无论是提高退火温度,还是改变引物量,模板量,酶量或延长延伸时间,都始终存在一约110bp大小的固定非特异片段。而我的引物经过比对绝对没问题。最初的反应详情如下: 反应体系:总体积20ul, 模板DNA:4ul, 10×Baffer: 2ul, Taq polymerase(2.5U/ul):0.4,引物(5uM):2ul, dNTP(2.5mM):1.6ul, Mg2+(25mM):1.2ul,10×Baffer: Tris-HCL:20mM, KCL:20mM,反应条件:94 ℃ 5分钟,94℃30秒,61℃30秒,72℃30秒,35个循环,72℃ 10分钟。希望大家帮忙分析一下,再提些建议,谢谢!