如何提高腺病毒细胞感染能力

可使用腺病毒感染增强剂(Envirus-Adv)提高腺病毒的感染能力
一 重要提示
1.采用EnvirusTM-AdV增强后,感染时的细胞融合度对感染效果有影响,建议细胞融合度在30-50%左右时进行感染实验。
2.确定了细胞量以后,建议采用倍比稀释的方法,用不同量的腺病毒(MOI值:1-1000pfu/cell)进行实验以确定最佳的腺病毒用量。
3. EnvirusTM-AdV和病毒的稀释液采用和细胞基础培养基一致的无血清液体,如无血清DMEM或1640。
二 实验过程(以24孔板感染为例)
1.提前一天细胞铺板
提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在30-50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。
2.感染
⑴将4ul的EnvirusTM-AdV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成EnvirusTM-AdV稀释液。4℃静置5分钟。
⑵将适量病毒原液或稀释液与EnvirusTM-AdV稀释液轻柔混匀,4℃静置15分钟。
注:如采用病毒原液直接混合出现沉淀,建议用与⑴等量同样的无血清稀释液稀释病毒。
⑶将上述混合液加入到含完全培养基的细胞上,37℃培养8小时后观察细胞状态,如没有明显变化,不要更换培养基,继续培养。由于腺病毒感染较快,可分别在12,24,48小时观察表达情况。
注:适当减少感染时的细胞培养基量可以增加感染效率,但也可能增加细胞毒性。如出现细胞毒性可增加培养基量或更换培养基。