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谢谢楼主，我昨天第一次养心肌细胞，但今天看状态很不好，贴壁松，不舒展，未见伪足，更加没有搏动，我把步骤大概写一下，希望楼主指点一二：
一共用了6只乳鼠，整个过程中，除了洗心脏和剪心脏用PBS+glucose外，中和用的培养基是含钙镁的，配胰酶用的溶液是PBS+glucose，即不含钙镁的：
1. 75%消毒小鼠，消毒后小鼠是活的；
2.开胸，迅速取出心脏，置PBS+glucose溶液；同样的方法处理其余5只乳鼠；
3.修剪6只乳鼠心脏，之后剪碎（剪不成1 mm的，大约1-3 mm不等吧；我是全部心脏取出来之后，统一修剪再统一剪碎，这样会不会不好？）；
4.胰酶（Gibico，买来就是配好的，0.25%，含EDTA，稀释成0.8%，用PBS+glucose稀释，胰酶事先已温育）消化，6只乳鼠同在一支50 ml离心管，放7 ml胰酶，37度水浴，10 min，边浴边轻摇（整个过程都在轻摇，基本没怎么间断，是不是不好？）；
5.取上清（没有静置）置于另一支50 ml离心管，该管置于冰中，预先放置预冷的20% FBS+M199（含钙镁）；
6.继续加入7 ml胰酶，37度水浴消化，消了6次，分别是10 min，10 min，6 min，10 min，6 min，6 min，取上清和中方法同上；最后三次消化可见胶冻状物质，我用枪头较用力吹打，可打散；
7.3支离心管离心收集细胞（未过滤），以68 g，5 min离，见不到沉淀，换用200 g 5 min，沉淀还是不明显，将看到的沉淀吹散后以300 g 10 min离心，可看到少许沉淀；
8.每支离心管以2 ml培养基重悬，种6孔板中的3个孔（1支管的东西种一个孔），镜下观察只有第3支管（即最后两次消化得到的上清）细胞才多，前两个支管收集的细胞加起来都没有第三支管一半多，而且有支管的细胞不透亮，稍有皱缩（今天看这个也的细胞基本死光）；
9.差速1 h。
