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标题:【讨论帖】心肌细胞培养互助

ero11[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你在取心脏时有没把剪下来的心肌组织在消化前冲洗干净，取出心脏后，应在PBS中轻轻挤几下好让心脏内血液排空，然后马上剪下心室，放入另一干净的PBS中清洗，然后再取下一个心脏，不能等到取完所有心脏才清洗。在点板4小时左右，换一下细胞液。
另外是不是胰酶浓度太高了，最好用0.1％左右的好一些，就是要消化次数多一些，这样对细胞损伤小，可能细胞状态能好一些。最好取3－4天的乳鼠，这时候的乳鼠心肌细胞状态较好。
做Confocal的话，需要养在24孔板或者6孔板中，并在点板前在孔内放上玻璃片，让细胞长在玻璃片上，这样才便于试验时的观察。
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢上面的这位兄弟！可是剪下来的心肌那么小，用镊子逮都逮不住，用什么怎么挤啊？另外用0.1%D 胰媒，每次消化多少分钟合适呢？
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发表于 2015-5-11 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先挤一会再剪，剪心室，大概就是心脏的下半部分。放入另一干净的PBS溶液中，再洗洗。0.1％的胰酶每次消化大概10分钟左右，吹打后，静置1分钟左右，然后吸取上清，加入胰酶继续消化。
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join[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位大虾，你们培养乳鼠心肌细胞用哪种血清？我目前用国产四季清胎牛血清，总觉得细胞生长状态不理想，搏动不一致且持续时间短，有时2，3天就不跳了（我没加BRDU），细胞内出现点状物质，像是快凋亡的细胞，是不是营养不够？
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gmt[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位同胞，你们做心肌细胞培养用的剪子和镊子是普通的吗，还是纤维剪子和 镊子？取出的心脏的包膜是如何取下来的？
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的乳鼠心肌细胞原代培养是先备用三个培养皿，里面加入HANKS液，取出心脏后放入培养皿中依次清洗三次，清洗时注意剪掉非心肌组织，及血渍后，将心肌组织剪碎约1MM大小，后用0.125%胰酶消化,每次约8分钟,前2次舍弃上清,直至将心肌全部消化为止.我的经验一个乳鼠约1ML培养液.
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用激光共聚焦显微镜下观测心肌细胞的哪些指标?我也试测过好象不太理想.可否提供我一些经验?谢谢.
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october7[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我看很好呀，我很高兴这个小组的成立，但是每次上来怎么找我们的小组呢？有专门的空间么？
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发表于 2015-5-11 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 october7 于 2015-5-11 18:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我看很好呀，我很高兴这个小组的成立，但是每次上来怎么找我们的小组呢？有专门的空间么？

可以点击My Forum,在My Forum中找。也可以加入My favorites,找起来更方便。详见新手成长板块相关内容。
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发表于 2015-5-11 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

尊敬的各位老师，请问心肌细胞培养有没有可能获得人的心肌细胞来培养，比如心胸外科手术，或者介入，或者购买；如果不能，那是用成年大鼠的还是新生乳鼠的心肌细胞对实验说服力强；培养基用DMEM，它的高糖和低糖的有什么区别；是否不含培养基谷氨酰胺的更好，因这样可以减少纤维细胞的增值，使培养的心肌细胞更纯；还有培养瓶用25平方厘米的还是75平方厘米的好些，用75平方厘米的是不是太大了，心肌细胞不容易接触生长波动；还有心肌细胞培养所用的缓冲液有哪些，配平PH值时用的标准液在哪里可以买到，具体怎样自己配制缓冲液，如Hank's液，PBS液等？啊，一起问了这么多困扰我的问题，急盻各位老师指点迷津，虽然我也在丁香园里下载了一些关于细胞培养的资料看，但对以上问题还是拿不准，特此请教您们，衷心的感谢！
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