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不好意思,因知识所限,第一个问题无法回答。
第二个问题,我当时也考虑过对u6,是进行特异性的反转录(用u6-r),还是用oligo(dT)常规扩增,后来选了只用u6-r做。考虑到既然mirna用了特异性的引物,u6也用特异性的,更具有可比性。
第三个问题,你提取mRNA的试剂是trizol?还是过柱子纯化miRNA?
u6的ct值问题,根据你逆转录时加入的量有关,我做过9,但是5.6.7没有做过。
1、你得实验组和对照组u6ct值一直很稳定,都是5.6.7?
上面你回答是,那么加上你的u6溶解曲线是狭窄的单峰,估计你得结果没有问题!