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标题:【求助】请高手鉴定破骨细胞

雪原[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢回复！我用400倍的染色后看细胞都没有你的大，是不是我分离的不对？
那经过造血干细胞分化为破骨细胞，需要培养多少天？需要加1.25-二羟基维生素D3吗？
我还想问问，依您的经验来看，我的是吗？
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babybabe[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道楼上战友分离的是否是小鼠的破骨细胞，种属差异可能也是存在的。
个人诱导培养过破骨细胞，但是没有直接分离获得过破骨细胞，所以不敢妄下结论您获得的是否为破骨细胞。
具体的培养和鉴定方法在附上的文献内有详细的介绍。
好运！
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雪原[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢战友回帖。我分离的是大鼠破骨细胞，大概有2-3月龄。其实应该用乳鼠的，但是我是新手，借着师哥分离心脏后的大鼠就继续做了，不知道这样差异会不会很大。具体文献也看过，国内外也没有破骨细胞的纯分离培养。只是在形态学方面想请教一下大家。
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雪原[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

附上我的方法，请大家多多指点：
分离得到大鼠股骨，胫骨；刮净骨外膜及其他附着组织；于培养液中剪掉两端骨诟；用针头抽取培养液，然后冲洗骨腔；直至骨腔变白；将冲洗得到的悬液静置。吸取上层培养液于6孔培养板培养。24小时后吸取培养液以去除不贴壁悬浮细胞；更换培养液。3天后，吸取培养液80%继续培养。
2-3天时，细胞明显贴壁，且有长长的伪足出现。个别细胞还呈现空泡状，但在400倍倒置相差显微镜下看不到多核状。3天后，经瑞氏染色后，细胞多核状态不明显，上面有图。
我现在买不到薄牛骨片，无法进一步鉴定；各位大侠有相关经验，敬请赐教！Smile
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雪原[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我还想问一下高手们，在冲洗骨髓腔的过程中，会不会有成纤维状的细胞？
如果培养基里面不加1，25-（OH）2维生素D3，破骨细胞是不是就分化的晚？如果染色主要见到的是单核，但有伪足的细胞，那是不是破骨细胞前体？敬请赐教
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quiqui008[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不必客气
我感觉感觉骨髓腔内的应该不是成纤维细胞
造成其他原代贴壁细胞污染的主要应该是上皮细胞
再说骨腔内应该是没有啥成纤维组织的
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quiqui008[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前面3张好像焦距有问题
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雪原[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

附上最新破骨细胞多核形态瑞氏染色图片，请高手帮忙鉴定。


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附件
2015-7-11 17:37
43526812.snap.jpg (43.39 KB)
 
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雪原[使用道具]
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发表于 2015-7-11 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于TRAP染色鉴定，需要购买利副品红，AS-BI磷酸盐，请问哪里能购买到？普通试剂公司都没有这种药品。请大家帮忙！
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发表于 2015-7-11 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 雪原 于 2015-7-11 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

关于TRAP染色鉴定，需要购买利副品红，AS-BI磷酸盐，请问哪里能购买到？普通试剂公司都没有这种药品。请大家帮忙！

SIGMA 有全套试剂盒卖，也可以分开买试剂盒内的单种试剂，全套试剂盒大约１４００元。
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