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标题:【求助】关于上海生工引物合成的问题

milkdog[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是刚开始做PCR,引物也是在生工合成的,每次ACTIN都能P出来,actin不是生工的,但自己的东西就P不出来,总觉得是自己做的需要改进,但现在觉得是不是引物有问题呢?都是评分很高的引物,以前博士师姐也做出来的引物.
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dog002[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
听说英骏是最好的。
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any333[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物合成本身应该查别不大，有的时候先看看自己引物特异性怎么样。分析原因应该全方位进行。我也遇到过前面的情况，具体原因都不同。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征

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引物合成本身应该查别不大，有的时候先看看自己引物特异性怎么样。分析原因应该全方位进行。我也遇到过前面的情况，具体原因都不同。

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

差别不大？为什么同一批引物，长度基本一致，有的跑出来有的跑不出来呢？
附图中的上排从Marker开始，右边有三个，下排有四个，其中1，3完全没有，5只有很弱的带，要知道我是20微M的上了5微升的样，结果竟然还是这样？！
怎么解释？


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dior[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
差别不大？为什么同一批引物，长度基本一致，有的跑出来有的跑不出来呢？
附图中的上排从Marker开始，右边有三个，下排有四个，其中1，3完全没有，5只有很弱的带，要知道我是20微M的上了5微升的样，结果竟然还是这样？！
怎么解释？
......

=======================================================================================

呵呵，我不知道你重复这个试验没有？重复的时候打乱顺序重复，你试试看看，看是否相应的标本是一样的结果。
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newway[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果，你是用EB染色的方法来检测的话，那么染色的效果与引物的G含量成比，没有G的引物是染不上色，也就是说检测不到条带，你可以看一下你的引物里G的含量再说。
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-8-3 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上面的兄弟说的有道理，单链引物染色跟引物的序列有很大的关系，用琼脂糖来检测是很不正确的方法，建议用分光光度计来测定引物含量．
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shkudo[使用道具]
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发表于 2015-8-3 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一并回复楼上的几位吧。我重复了4次，结果都一样，我不想再在这上面浪费时间了，我很有点怀疑这几位跟生工有密切关系啊，因为我前两天已经让生工来这看了。
OD值测了，有的甚至为负值，你怎么解释？
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2015-8-3 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
怎么没有人早说啊
我都要哭了
我正在生工订了N多条引物啊
之前订了几条老是做不出来，郁闷死了
公司为什么这么不负责任啊？？？
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vcve[使用道具]
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发表于 2015-8-3 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的怀疑是多余的,我们都是搞生物的,做PCR这样的问题我也碰到过,我想说的是我说的观点肯定是没错的,OD值测后如果没有吸收值那是肯定没有东西了 ,至于OD值测后，有的甚至为负值,我到没碰到过,不知你的分光光度计是不是有问题.
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