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标题:【求助】单抗电荷异质体

veiwu[使用道具]
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【求助】单抗电荷异质体


大家好,我有个关于单抗电荷异质体的问题想问下,
1、氧化和ASP异构化应该会形成碱性峰,为什么张博的PPT里把这2项列为视情况而定了?
2、另外我最近做个关于光照对单抗稳定性影响的实验,光照10天后用CEX(阳离子交换色谱)检测发现酸性峰增高而不是碱性峰增加,请问这个现象如何解释?
非常感谢!


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对定量生物学活性的影响?
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luoliqiong[使用道具]
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只是想搞清修饰的对电荷异质体的具体影响。不知道哪位大牛能慷慨解答下,有劳了!
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1、不一定形成碱性峰,因为氧化和异构化影响的是构象,并不是酸碱性基团直接的增加。而构象的改变带来的与色谱柱之间的结合情况是不定的。 我自己做的研究也发现,氧化也形成酸性峰。异构化我没怎么研究清楚。可以多看看这方面的文献
2、光照稳定性,我看到过详细做这块的研究,,酸性峰增加也是很正常,其一是脱酰胺,二是焦谷氨酸环化,三组氨酸等氧化均会形成酸性峰。详见附件文献
若有疑问可以在一起探讨探讨。
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大家好,我有个关于单抗电荷异质体的问题想问下,
1、氧化和ASP异构化应该会形成碱性峰,为什么张博的PPT里把这2项列为视情况而定了?
2、另外我最近做个关于光照对单抗稳定性影响的实验,光照10天后用CEX(阳离子交换色谱)检测发现酸性峰增高而不是碱性峰增加,请问这个现象如何解释?
非常感谢!
......

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继续讲这个问题:1、天冬酰胺异构化对电荷的影响,目前所看到的均是在碱性峰中,但其因果还不得而知。它影响构象,随机性比较大,不好说决定形成碱性,可能还未发现。2、蛋氨酸氧化,同样影响的是构象。大多数文献说得是在碱性峰,但其实有时它会在酸性峰中产生,而我的结果也是酸性峰, 你可以用双氧水试试。
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大家有没有使用质谱解析抗体修饰的书籍或文献可以推荐?我一直挺疑惑质谱到底怎么实现的。
有人曾经给我建议,将整个抗体进行酶切,直接进质谱进行肽段分析,整体分析哪些肽段发生修饰,这种思路可行吗?质谱解析是不是非常复杂?
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大家有没有使用质谱解析抗体修饰的书籍或文献可以推荐?我一直挺疑惑质谱到底怎么实现的。
有人曾经给我建议,将整个抗体进行酶切,直接进质谱进行肽段分析,整体分析哪些肽段发生修饰,这种思路可行吗?质谱解析是不是非常复杂?

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没别的办法,要想搞清楚那个位点发生修饰或者异质,必须采用质谱进行肽段分析。整体分析可能只能推测发生哪类变化,但是对抗体大蛋白很难。
要是多肽或者小蛋白,或许可能。例如加16倍数的可能是氧化修饰,分子量不变的可能Asp异构,分子量多1可能脱氨等等。
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ero11[使用道具]
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质谱的理论知识参考书籍 网上有很多,翻译后修饰的文献也一推一推网上搜搜都是。上传一篇共参考。
一般都是CRO公司直接给你测的,不用自己分析结果,自己也不会分析那些离子源。
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chengjie79[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 ero11 于 2015-9-5 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
质谱的理论知识参考书籍 网上有很多,翻译后修饰的文献也一推一推网上搜搜都是。上传一篇共参考。
一般都是CRO公司直接给你测的,不用自己分析结果,自己也不会分析那些离子源。 ...

光照造成的一些氨基酸的变化,有时很复杂也很有意思。比如Trp吸收能量会造成一些不仅仅是自身的变化,进行传递还会导致一些其他氨基酸的变化,或者光照直接对二硫键照成的影响,都是有文献可查并且case by case的。
个人觉得有条件最好自己弄台质谱,CRO不总是那么靠谱。
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vvmmoy[使用道具]
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glycan variations为什么是碱性峰?我理解glycan variations是由马来酸之类的造成的adduct formation,应该是酸性峰。难道是两个概念?
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