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标题:【求助】抗体杂质检测项中的HCP残留酶联免疫检测...

大桃子同学[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说错了，这个应该归于准确性。因为HCP标准品是试剂盒提供的，跟自己产品中HCP肯定有差异，我们要确认是Cygnus的这个试剂盒能否检出我们自己产品中所有种类的HCP？因为我们用的CHO-S表达系统，根据上图Millipore的实验研究，其检出率只有50~65%，是不是就说明我们用这个试剂盒进行检测放行时，它的检测结果是低于真实值的？


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发表于 2016-4-11 22:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

专属性强的自然是自建ELISA方法，而不是商品化通用型ELISA试剂盒。

国外有些品种报产阶段，要利用自己的宿主（含空载体）免疫动物，获得的抗血清，分离纯化的多克隆抗体制备ELISA试剂盒。这些多克隆抗体自然是针对自己的宿主，但是这个方法也有局限性。1）开发周期半年以上，且成本过高。2）免疫动物获得多克隆抗体，只针对高免疫原性HCP。对于低免疫选型HCP，存在漏检的可能。
当然，除了ELISA外，也有2D-page，LC-MS等方法，但是这些还未在工业界广泛使用
不了解。国内报产阶段的HCP是否要求建立专属性方法。
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发表于 2016-4-11 22:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得millipore的ppt讲的两种方法对比其实是两个事情：LCMSMS比较的是试剂盒提供的HCP和自己发酵产生HCP的表达谱差异。2DWB比较的是试剂盒提供的抗体覆盖自己发酵产生HCP的能力。抗体亲和力、蛋白免疫原性的原因覆盖不了这么多蛋白，当然会比LCMSMS结果覆盖率低。
millipore银染的300多种蛋白也比cygnus号称的能检出CHO HCP 700多种蛋白低很多。（不确定是不是用的cygnus盒子）这些可以发给cygnus技术支持问问。
其实不管检出率多少，参考6L所说方法，如果用自己制备CHO HCP定量作为标品，用商业化试剂盒检测，能得到相对浓度，是否可行了？
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发表于 2016-4-11 22:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在CDE 生物制品药学部都有建议这么做 建立过程特异性的HCP检测方法。
下面这张PPT是白玉老师在“生物类似药研发与评价”研讨班上分享的案例。
她就列举了采用商业HCP试剂盒做临床前研究导致临床试验失败的案例。
现在建立过程特异性的HCP检测方法越来越被认可，但是应该也不是强制要求。


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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
中检院一篇旧的文献中看到的。上周在研讨会上听到Cygnus 3rd Generation CHO HCP kit在CHO-K、CHO-S、DG44三种细胞系中的检出率均只有60%左右，是通过2D WB和LCMSMS两种方法比较的。如果回收率60%左右，专属性验证是否就通不过了？ 如果Cygnus的试剂盒升级了，换用同种升级的试剂盒是否还要重新验证？

==========================================================

准确度试验，回收率60%我觉得太低了吧 换了试剂盒肯定是要重新做验证的
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发表于 2016-4-11 22:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我好想记得10年左右，欧盟批了一个生长激素的类似药。审批过程中，就是宿主蛋白超标，后来为此专门增加了一步纯化工艺。此前，06年也是生长激素的 类似药就没有获批。
CDE老师讲解的是不是这个案例呀
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发表于 2016-4-11 22:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tie8 于 2016-4-11 22:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我好想记得10年左右，欧盟批了一个生长激素的类似药。审批过程中，就是宿主蛋白超标，后来为此专门增加了一步纯化工艺。此前，06年也是生长激素的 类似药就没有获批。
CDE老师讲解的是不是这个案例呀 ...

她没说 听你这么一说 应该就是这个吧
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发表于 2016-4-11 22:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
国内申报临床阶段的我所了解的绝大多数是商业化试剂盒，之前申报生产的也是商业化试剂盒，现在技术审评会提出要求采用特异的自制试剂盒，貌似现阶段也没说死这个事。
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发表于 2016-4-11 22:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tie8 于 2016-4-11 22:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我好想记得10年左右，欧盟批了一个生长激素的类似药。审批过程中，就是宿主蛋白超标，后来为此专门增加了一步纯化工艺。此前，06年也是生长激素的 类似药就没有获批。
CDE老师讲解的是不是这个案例呀 ...

是的，就是这个案例
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发表于 2016-4-11 22:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

商业化的HCP kit检测的结果只能代表通用的那些HCP的含量和比例，但是每个项目都有其特异的HCP比例，且各个蛋白对HCP的检测干扰程度不一样，所以见了专属的HCP检测方法是非常必要的。我们公司申报的一个产品，就被CDE要求补充特异的HCP检测方法。
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