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我要鉴定内皮细胞,前面的贴子都拜读了,还是有一些问题请教大家:
1: 我需要用两种荧光标记的抗体(FITC和DIL直接标记)来鉴定培养的内皮细胞,前者是膜抗原,后者是可以吸收到胞浆中的,请问加入Triton X100,会影响胞膜的标记吗?这两种不同的荧光抗体要分开在不同的爬片上标记吗?
2: 因为培养的是贴壁生长的内皮细胞,为了能保持其变形的形态,是将消毒的盖玻片放进培养板培养待细胞贴壁变形后拿出来染色,还是将细胞从培养孔中消化后放到涂有多聚赖氨酸的盖玻片上染色观察,那种方法更好一些?因为国外的文献是用纤维连接蛋白包被培养孔培养细胞,我是否有必要再用多聚赖氨酸包被制作爬片用的盖玻片?
3: 制作好爬片后,就按照主任说的多聚甲醛固定,封闭,标记等步骤操作,因为我买的是直标的抗体,,是否可用0.01M的PBS稀释相应的荧光抗体后直接加到爬片上孵育后封片观察?封闭用人血清可以吗?封片如何操作?
4: 在孵育的过程中要是爬片风干了会影响结果 吗?
5: 在观察的时候,一般是把盖玻片(爬片)放在载玻片上,请问是将盖玻片(爬片)有细胞的一面朝上还是朝下?
菜鸟问题,见笑了