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我做WESTERN 遇到奇怪的问题。
要做一个100左右大小的蛋白，提取蛋白后，先煮沸，后－20度冻存。常规跑胶转膜，加抗体曝光，在需要的位置看到明显的条带，另外50－70左右还有另外一条较弱的条带。后来蛋白又重新解冻，煮沸，重做WESTERN. 这次虽然还是2条条带，可是变成了100左右较弱，50－70左右的那条较强。
问题1 为什么2次结果不一样？
2 上样前煮沸，或者提取蛋白后立刻煮沸冻存，上样前再解冻再次煮沸有区别吗？
还有一个怪现象
我曾经作过几个分泌性蛋白，如IL-10。抗体说明书上指示目标蛋白在20KB左右，可是我做出来在50KB左右有明显条带，20左右没有看到。追溯文献，几乎所有文献都是用ELISA来检测。极少看到用WESTERN的报道。
问题1 为什么我的条带的位置不对？
2 是不是有些蛋白不适合WESTERN？怎样判定适合不适合？
谢谢
