小中大老师，请问我需要做的目的蛋白有90kd,150kd,200kd的，内参用的是GAPDH，
以前转膜后，考染看到72KD以下的几乎没有剩余什么条带，而其上却残余很多，因此今天配转膜液时里面加了SDS。
配方是Tris 3.02g,甘氨酸14.4g，SDS 0.375g，甲醇200ml，加ddH2O至1000ml，用的Bio-rad的电转系统，湿转，恒流350mA,150分钟，结果marker条带，仅剩余72KD以上的4条，以下条带全没有，而且这几条marker条带颜色也非常淡，跟以前的相差很大，以前我也是这样的条件，就是buffer里没有加SDS，
是不是加了SDS以后要改变转膜条件了呢？
我最大的蛋白分子量是200kd，GAPDH仅36Kd,那么转膜时，需要怎么兼顾呢，谢谢啊！
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湿转建议用25mM tris，192mM glycine，0.1%SDS，20% 甲醇
300mA 转膜时间 200KD，2h，150KD，1h40min，90KD，1h30min，建议用beta-tubulin作为内参（分子量55KD）
