小中大1,300mA转膜,要降温!
2,缓冲液肯定不能重复使用了!
3,把胶剪好,转不同的时间
4,电泳缓冲液内槽肯定不能重复,外槽可以
5,转环是坚决不能重复使用的:甲醇蒸发;蛋白转移后有一部分会在缓冲液里
6,大分子量蛋白占总蛋白的量是比较小的,先染胶看条带。但是110K的很好做
7,可以一起跑,因为不同的胶浓度在分离时的速度基本差不多
祝你好运
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谢谢老师,我估计还是缓冲液的问题,我每次都降温了,用的冰,今天第一次碰到这种情况
您的意思是我跑两块胶,电泳时间还是一样,但是转膜时,一起转,到时候先把转时间短的膜拿出来,再继续转时间长的那块膜么?
另外转缓每次都要用甲醇200ML,呵呵,做的多用量还是很大啊。但我还是听您的,每次转缓和电泳都新配算了
进口抗体已经回来了,但是说明书都说要求一抗4C 过夜,但也有人说37C一小时也行,甚至不摇,直接放在37C 温箱中,呵呵。我一般都是用BSA稀释后过夜的。
今天失败的膜照片已经发至您邮箱,麻烦您有时间看看,谢谢