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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-2-5 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请问以下，NF-kB活性检测到底是EMSO好，还是WesternBlot好？听说NF-kB活性检测试剂盒有不需要P32标记的，是吗？怎样才能买到？非常感谢！
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发表于 2013-2-5 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教老师，转模时直接用电极液作为转膜缓冲液好不好？

=====================================

不行啊
转移缓冲液里有甲醇，起固定胶大小作用的
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发表于 2013-2-5 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢老师。如果保险些，您认为这五个蛋白26,43,84,91,113应该怎么分胶来做，空白孔BUFFER的加法有什么技巧么！？就是您说得泳道变形是BUFFER加法不对造成的么？以前没注意过这类问题。o(∩_∩)o.

============================================================

1，26，43用12%胶
2，84，91，113用10%胶
3，空白孔加buffer技巧：buffer的上样体积我一般会选择同边上样品一致
泳道变形因为上样体积不一致
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发表于 2013-2-5 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
多发性硬化感染性心内膜炎

=============================================================================================================

我想请问以下，NF-kB活性检测到底是EMSO好，还是WesternBlot好？听说NF-kB活性检测试剂盒有不需要P32标记的，是吗？怎样才能买到？非常感谢！

========================

EMSA与WB谁好我说不上来
各有优缺点吧
看你实验的设计了
有生物素标记的试剂盒
我用过的是Pierce的盒子
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发表于 2013-2-5 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
心肌梗死
请问老师，26KD，40KD，58Kd转膜，湿转200MA，1H，转缓：100ml甲醇，14.4甘氨酸，3.02g tris, 条件合适吗？谢谢老师！
电泳是5％浓缩，12%分离胶，80V30min, 120V75min.
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发表于 2013-2-5 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jujuba 于 2013-2-5 11:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
心肌梗死
请问老师，26KD，40KD，58Kd转膜，湿转200MA，1H，转缓：100ml甲醇，14.4甘氨酸，3.02g tris, 条件合适吗？谢谢老师！
电泳是5％浓缩，12%分离胶，80V30min, 120V75min. ...

甲醇用20%
再加0.01%的SDS
可以用300mA 1h
转膜时注意降温
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发表于 2013-2-5 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1，26，43用12%胶
2，84，91，113用10%胶
3，空白孔加buffer技巧：buffer的上样体积我一般会选择同边上样品一致
泳道变形因为上样体积不一致

==============================================================================================================

谢谢老师。
请问如果倒胶4度保存，我一般是用蒸馏水和滤纸包着，第二天再跑用胶有没有大的影响，有的人说没影响，有的人说过夜的胶跑的不好，还有人用电泳缓冲液打湿滤纸包住保存在4度冰箱。

今天转膜时将膜放到滤纸上，发现膜的边缘是卷曲的，就像波纹样，用小试管履平后好像还是有点卷，不知道怎么回事？

请老师给点建议行么？
胶最好当天倒么？

考马斯亮蓝染胶是不是那种测蛋白用的考马斯亮蓝？以前没染过胶， 染了还需要用TBST洗么？
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 小中大


QUOTE:
原帖由 zwsyrt 于 2013-2-5 11:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
1，26，43用12%胶
2，84，91，113用10%胶
3，空白孔加buffer技巧：buffer的上样体积我一般会选择同边上样品一致
泳道变形因为上样体积不一致

================================================================================= ...

用蒸馏水和滤纸包着
过夜没事
分离效果很更好
染色与脱色配方很简单，建议自己上网搜一下
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-2-5 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 NBA 于 2013-2-5 11:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


用蒸馏水和滤纸包着
过夜没事
分离效果很更好
染色与脱色配方很简单，建议自己上网搜一下

今天转膜时将膜放到滤纸上，发现膜的边缘是卷曲的，就像波纹样，用小试管履平后好像还是有点卷，不知道怎么回事？

过夜保存胶梳子需要拔么？
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发表于 2013-2-5 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 zwsyrt 于 2013-2-5 11:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


今天转膜时将膜放到滤纸上，发现膜的边缘是卷曲的，就像波纹样，用小试管履平后好像还是有点卷，不知道怎么回事？

过夜保存胶梳子需要拔么？ ...

1，过夜保存分离胶，浓缩胶建议用前再配
2，如果是这样的膜，我是不会用的
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