小中大我做了好大半个月的WB，都只能做出33KD和内参43KD的蛋白，27的和19的一直都不出来，转膜后丽春红也染不出，换了小孔径的膜，转膜条件也调了好多次，结果都一样。
疑小分子量蛋白降解，今天又重新提取了蛋白，裂解液为自配三去污，（我们实验室一直用的配方，先前有人多次做出12KD的条带来），超声打碎（超声的次数多些会不会导致低分子量蛋白降解呢？），加热8分钟，高速离心，去上清，BAC测得浓度分别是10ug/ul,13ug/ul，上样20ul,蛋白总量100ug以上了，12%的胶，80V 30min，100V 到底，切下两个泳道的考马斯亮蓝染色30min，脱色后图片如下。上面的蛋白条带都集中在55到30KD，但在30KD以后蛋白就好像一下消失了样的，一个泳道的蛋白干脆就完全没有，另一个隐隐约约的有一点点。另外的几个泳道都到转到膜上，丽春红染色效果和胶的情况一样，30以上的有条带，以下的一片白板。
为什么我的蛋白在30KD以后就没有了呢？多次提取的蛋白都是这样。
思考：1.我的细胞（A549和A549/DDP）小分子量蛋白表达本来就少？但也不至于跑胶都跑不出来啊。
2.细胞裂解液有问题？但同样配方，师兄们却可以做出小分子量的。而且我自己的33KD的也能做出来。
3.跑胶没跑好，小分子量蛋白可能还在Mark指示的30KD左右？但我用10%的胶跑的效果也差不多。
4.我的细胞是从另一个实验室带去的，中间间隔大概30分钟，我就用一般的盒子装了那过去的，会不会是这里出问题呢？
急啊，总是那两个不出来，折腾我好久了，请各位帮我分析下，谢谢啦！
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从你的图来看电泳就有问题
先解决SDS-PAGE吧
后面的问题再慢慢解决
