小中大楼主,您好!
我最近做western遇到一些问题向您请教下。抗体是cell signal的,第一次做的时候一抗按照1:2000稀释,二抗1:2000稀释,蛋白上样量15ug,没有杂出任何条带,考虑可能一抗浓度不够,第二次把一抗的浓度调整为1:1000,蛋白上样量30ug,因为是连续做的,所以接着用了前面的抗体,把浓度调整了一下,还是什么都没有杂出来,第三次考虑二抗的浓度过高消耗了ECL底物,把二抗浓度调整为1:4000,上样量40ug,还是什么都没出现,此外第二次actin出现了一次,第三次actin用的半个月以前配的杂出来了,新近配的没杂出来,请问楼主是什么原因呢?
===========================================================================
1,第三次actin用的半个月以前配的杂出来了,新近配的没杂出来,你说的新近配的是什么意思
2,目的蛋白是什么?