小中大楼主你好,我用BCA法测定的蛋白浓度,根据标准曲线计算出来的浓度比曲线的最高值要大很多(曲线标准品的最高浓度是0.5mg/ml,计算出来的样品浓度最小的是0.85mg/ml,最大的是4mg/ml)这样得到的样品浓度是不是不准呀?
我的样品上样达到了100ug,目的蛋白一抗1:500(推荐浓度为1:1000)但是压片20分钟后条带还是不太清楚,一开始2抗1:10000,后来1:5000还是不行;国外老板用15ug就可以做出来,一抗体1:1000,虽然抗体的公司不一样但是我的这个是CST的也不差呀,他的2抗1:2000.现在很困惑,不知道下一步怎么调整!
内参做出来但是表达不太一致,是不是蛋白测定有问题的原因呀?谢谢楼主!
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BCA的标准品梯度为什么不从2mg/ml开始?
一抗CST的倒是不错,但是这里面涉及到目的蛋白的提取,你和国外老板比?
你们的系统条件一样吗?
就连最后一步在ECL的敏感性上都有很大的差别