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标题:【讨论帖】western blot问题解答

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2013-2-27 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思
把你这个帖子忘了
我看你一直在回别人的帖子
这种情况可能与抗体质量有关

===============================================================================================================

呵呵，我只是间接的把自己的低级错误给大家晒一下希望有用而已，非常感谢您给大家这个平台！我用其他的细胞模型相同的抗体及wb条件做出条带很漂亮，不知还有其他可能？谢谢！
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发表于 2013-2-27 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
天冷之前，WB做得还比较顺利，天冷后，发现胶不容易凝了，版主，给点好的建议吧！
最近两次actin跑出来是这样的，帮我分析分析吧
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发表于 2013-2-27 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢版主回复，太难了，做了很久，现在还没解决。

请各位大虾分析分析一下我做的western 到底是什么原因？
我跑的是amyloid beta 42，分子量4kD，图中前面五个泳道是标准品，后面的是果蝇组织提取物，为什么全都聚集在上面了呢？同上样量有关吗?用的是16%的tricine胶。

这么小的还没做过
不知道如何回答
是电泳还没有跑出来吧

======================

你试试其他方法吧
这样的多肽确实不好做哦
如ELISA等
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发表于 2013-2-27 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，我只是间接的把自己的低级错误给大家晒一下希望有用而已，非常感谢您给大家这个平台！我用其他的细胞模型相同的抗体及wb条件做出条带很漂亮，不知还有其他可能？谢谢！

===========================================================

你这么说的话那问题就出现在这次的样品上，而与你的操作及抗体无关了
呵呵
我出现过这样的情况：HepG2细胞做同一抗体的WB很好
做Hamster 肝组织WB就不太好，有两条带
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发表于 2013-2-27 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
天冷之前，WB做得还比较顺利，天冷后，发现胶不容易凝了，版主，给点好的建议吧！
最近两次actin跑出来是这样的，帮我分析分析吧

==============================

我感觉是你曝光的时候挪动了胶片
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发表于 2013-2-27 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主一个问题。用pvdf膜转膜之前，要用甲醇泡多久好。有人说不超过15秒，可还有人说20分钟以上，众说纷纭。请问这里面的学问。谢谢
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发表于 2013-2-27 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xue258 于 2013-2-27 13:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问楼主一个问题。用pvdf膜转膜之前，要用甲醇泡多久好。有人说不超过15秒，可还有人说20分钟以上，众说纷纭。请问这里面的学问。谢谢

我一般是处理15S左右（Millipore的PVDF membrane）
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发表于 2013-2-27 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近准备用western测细胞表面抗原的表达，此抗原表达很弱，不知道应该选择单抗还是多抗啊？谢谢
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发表于 2013-2-27 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zranqi_1 于 2013-2-27 13:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
最近准备用western测细胞表面抗原的表达，此抗原表达很弱，不知道应该选择单抗还是多抗啊？谢谢

什么蛋白？
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2013-2-27 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2085 NBA 的帖子

最近准备做western测细胞表面抗原的表达，此抗原表达很弱，请问这种情况下应该选单抗还是多抗？谢谢
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