蛋白质与蛋白组学

kt与p-akt还是比较好做的
DAB的效果比ECL差很多呗
为什么要选择DAB法呢？
你用什么裂解液、一抗、二抗、ECL，告诉我厂家及货号吧

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裂解液是自己配制的：5mlTris-hcl pH7.4, 3ml NaCl,定容到75ml，10ml10%NP-40,2.5ml10%Na-deoxycholate，摇晃至溶液澄清；1ml100mMEDTA，定容至100ml，2-8度保存，临用前加入抑制剂并立即使用：100ulaprotinin, 100ulleupeptin, 500ulpmsf, 500ulNa3VO4, 500ulNaF.
一抗是CST的，1：1000稀释，AKT抗体货号#9272，p-akt#4060；二抗是博士德的，货号BA1054，1：2000稀释；发光底物是SuperSignal West Pico (Pierce），货号3972.

裂解液是自己配制的：5mlTris-hcl pH7.4, 3ml NaCl,定容到75ml，10ml10%NP-40,2.5ml10%Na-deoxycholate，摇晃至溶液澄清；1ml100mMEDTA，定容至100ml，2-8度保存，临用前加入抑制剂并立即使用：100ulaprotinin, 100ulleupeptin, 500ulpmsf, 500ulNa3VO4, 500ulNaF.
一抗是CST的，1：1000稀释，AKT抗体货号#9272，p-akt#4060；二抗是博士德的，货号BA1054，1：2000稀释；发光底物是SuperSignal West Pico (Pierce），货号3972.

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1、SuperSignal West Pico (Pierce），货号肯定不是3972
2、裂解液没什么大问题
3、后续实验条件呢？

我最近在跑分子量110左右的目的蛋白，出现很奇怪的现象：彩色marker 跑到在分离胶中部时可以看的很清楚，但是等溴酚兰跑掉彩色marker 就看不清楚了（切胶是只能看到73红色以下的marker，73以上的基本看不到了 ，而且maeker的形状也不是条形的，变得很宽很散）。

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电泳时间长了会对marker造成不同的影响
加大上样量试试