小中大1、分子量怎么不标上呢
我已经标出分子量了。
2、你用的什么Marker?
我们用的Bio-Rad的Precision Plus Protein standards(双色)marker,共8条带,从250-10 kDa,转膜后可以看到marker都转到膜上了,但在杂交洗膜过程中,marker颜色强度逐渐减弱,曝光后在X胶片上只出来两条带。
3、不同的marker在不同的胶浓度里表现是不一样的
我们的浓缩胶是3%,分离胶是12%(采用如下单体贮液:丙烯酰胺19.55g,甲叉0.45 g,定容到50 ml)
这两天换不同样品杂交,还是出来这两条带,当时公司给我一抗的时候,纯化出来的蛋白分子量是26 kDa,现在我们杂交出来的条带差10 kDa,杂交结果可否用呢,出现这样的情况是啥原因呢?多谢版主了。
你检测的是纯化后的蛋白还是内源性蛋白?
有可能是你的目的条带降解了
我检测的是从香蕉果实里面提出来的总蛋白,采用酚抽提法提取的。我100毫安转了5 h,是不是转得时间太长了导致目的条带降解?我如何来避免目的条带降解呢?
多谢版主!