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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-3-6 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下，如果我提取的蛋白浓度比较高，想要稀释的话，是不是必须在变性前稀释？

用什么稀释？？PBS还是什么啊？？？
谢谢您！

====================

变性前稀释
蛋白浓度高不容易降解
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发表于 2013-3-6 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主：
稀释蛋白用什么稀释好啊？？？
谢谢
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发表于 2013-3-6 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 KGZ564 于 2013-3-6 17:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问楼主：
稀释蛋白用什么稀释好啊？？？
谢谢

如果知道是什么提取体系
用蛋白抽提试剂稀释
如果不知道什么提取体系用PBS
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发表于 2013-3-6 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、胶有问题
2、蛋白样品处理的不好
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发表于 2013-3-6 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 NBA 于 2013-3-6 17:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
1、胶有问题
2、蛋白样品处理的不好

谢谢您的回复
样品每个只有30ug左右，我裂解液按照说明加了200（说明让20ug加100~200ul）。然后用超声处理的，处理的时候每次没有超过10秒，然后放入冰箱，过一段时间再处理的。
灌胶所需液体实验室都在共用，他们做的结果很好，我让他们替我带个样儿，结果染膜的时候他们的蛋白跑的转的很好，各分子量基本都有，但是我的泳道还是只有35以上的蛋白。
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发表于 2013-3-6 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢老师的指导！
我的一抗和二抗都是博士德的。
谢谢！
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发表于 2013-3-6 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
白血病
请教nba老师:
我要做骨髓液白血病细胞核中的一种460KD大的蛋白,请问该注意什么啊?
最好是有具体的实验步骤,我是刚刚进实验室的.先怎么样保存标本呢?
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发表于 2013-3-6 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教版主，我要从血液里提取蛋白做western,用什么方法提取蛋白比较好呢
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发表于 2013-3-6 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
忘了说，我要提取的是总蛋白，谢谢啊
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发表于 2013-3-6 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

老师是在上海的吗?是在什么公司的呢？哪个公司请了您这样的高手真的很幸运吧！！方不方便短我一个联系方式呢，很想到老师这里来学东东，很想来见识一下高手是怎么样子的？
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