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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-3-9 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问个目的蛋白选择的问题：
做差异蛋白质组学方面的研究，目前用质谱鉴定出了一些蛋白，下一步准备选取部分蛋白质进行验证，我想请教一下：在进行WB和real-time PCR时，哪些目的蛋白可以进行验证，需要满足一些什么条件？(我做的标本是大鼠脊髓)

=====================

这个问题挺有难度的
选择有意义的差异蛋白
有经费就多验证几个
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发表于 2013-3-9 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教楼主，您认为转模时恒压好还是恒流好？
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发表于 2013-3-9 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教楼主，您认为转模时恒压好还是恒流好？

=====================

依据个人及实验室习惯
我用的是恒流
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发表于 2013-3-9 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个问题挺有难度的
选择有意义的差异蛋白
有经费就多验证几个

========================================================================================================

谢谢版主，请问每个质谱给出的蛋白都有相应的抗体吗，都能进行WB和real-time PCR吗？有什么方法可以查是否有该抗体吗，谢谢？
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发表于 2013-3-9 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢版主，请问每个质谱给出的蛋白都有相应的抗体吗，都能进行WB和real-time PCR吗？有什么方法可以查是否有该抗体吗，谢谢？

============================

应该是大部分都有商业化的抗体
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发表于 2013-3-9 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是大部分都有商业化的抗体

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谢谢版主！昨天试了下，去abcam等网站搜了下，
的确大部分有抗体，但是与质谱给出的蛋白质还是有一些差异的，
比如说质谱给出的是一个蛋白质的一部分结构，比如说蛋白质的某亚基，但是网站上查询时只有该蛋白质的完整抗体。我想请教一下，在这种情况下可以用完整的蛋白质抗体来检测，从而进行验证吗？
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发表于 2013-3-9 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，你好！
我想再请教你一个问题，我们实验一共有五个组，每组都有六只SD大鼠。那我做WB时，每组是不是只取一只大鼠的样本！
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发表于 2013-3-9 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢版主！昨天试了下，去abcam等网站搜了下，
的确大部分有抗体，但是与质谱给出的蛋白质还是有一些差异的，
比如说质谱给出的是一个蛋白质的一部分结构，比如说蛋白质的某亚基，但是网站上查询时只有该蛋白质的完整抗体。我想请教一下，在这种情况下可以用完整的蛋白质抗体来检测，从而进行验证吗？

=====================================

最好是能找到与你的质谱结果相匹配的抗体
你还可以上Novus，Abnova等找找
抗体公司很多啦
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 小中大
楼主，你好！
我想再请教你一个问题，我们实验一共有五个组，每组都有六只SD大鼠。那我做WB时，每组是不是只取一只大鼠的样本！

==================

要做统计处理吗？
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发表于 2013-3-9 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主，你好！
我想再请教你一个问题，我们实验一共有五个组，每组都有六只SD大鼠。那我做WB时，每组是不是只取一只大鼠的样本！

要做统计处理吗？
做不做统计处理差别在那里那，望楼主指教，不胜感激
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