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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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QUOTE:
原帖由 cwcwcww 于 2013-3-9 10:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主,你好!
我想再请教你一个问题,我们实验一共有五个组,每组都有六只SD大鼠。那我做WB时,每组是不是只取一只大鼠的样本!

要做统计处理吗?
做不做统计处理差别在那里那,望楼主指教,不胜感激 ...

做统计必须具备足够的样本量
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tianmei001[使用道具]
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非常感谢并敬佩楼主有问必答,并且答复的很快的精神!
楼主还有一个问题想请教你。我今天跑的条带,有一条带在膜的一边(准确的说,像一滴墨滴一样),并且转膜时此处的膜没有对这胶(剪得膜长的原因),还有此处本来是MARKER的位置,有蓝色的残留痕迹在此处,我在想是差点就转过去啦,还是MARKER蓝色痕迹造成的,我想下次调整转膜时间,32KD的蛋白质,我想下次250mA转35min,你个人觉得是什么问题那??
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非常感谢并敬佩楼主有问必答,并且答复的很快的精神!
楼主还有一个问题想请教你。我今天跑的条带,有一条带在膜的一边(准确的说,像一滴墨滴一样),并且转膜时此处的膜没有对这胶(剪得膜长的原因),还有此处本来是MARKER的位置,有蓝色的残留痕迹在此处,我在想是差点就转过去啦,还是MARKER蓝色痕迹造成的,我想下次调整转膜时间,32KD的蛋白质,我想下次250mA转35min,你个人觉得是什么问题那??

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转膜条件可以
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我也是和你一样,我是压得片子,30分钟也什么都没有。。郁闷
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请问 你现在曝出来啦嘛~我和你用的一个牌子的抗体。。。
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我在用考马斯亮蓝染色测定蛋白浓度时,将样品稀释为不同倍数进行测定,吸光度值都在标准曲线的范围之内,但是根据各个稀释度计算原浓度时,得出的原浓度是不同的,这是为什么?抓狂啊!……
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原帖由 windy+++ 于 2013-3-9 10:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我在用考马斯亮蓝染色测定蛋白浓度时,将样品稀释为不同倍数进行测定,吸光度值都在标准曲线的范围之内,但是根据各个稀释度计算原浓度时,得出的原浓度是不同的,这是为什么?抓狂啊!…… ...

每个稀释度的误差不同
还有不同稀释度中影响bradford的试剂浓度不一致
不能做线性比较
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原帖由 NBA 于 2013-3-9 10:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



每个稀释度的误差不同
还有不同稀释度中影响bradford的试剂浓度不一致
不能做线性比较

那请问楼主,我该用什么标准来选择其中的某个值呢?谢谢~
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NBA[使用道具]
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原帖由 windy+++ 于 2013-3-9 10:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


那请问楼主,我该用什么标准来选择其中的某个值呢?谢谢~

OD值在0.5-1.0之间的
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windy+++[使用道具]
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请问楼主:marker是蓝色的,相应pv膜被染蓝,ECL下会显色吗?
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