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我去年9月做的western,目的蛋白survivin,16.5KD,用ECL,在Las-4000 Luminescent image analyzer上显影观察的,目的蛋白显影非常好。当时沒做内参,观察完后放4度冰箱,PBST浸泡中。现时隔7月,重新把这个膜取出来,stripping buffer洗20分钟后,在以同法PBST洗涤,β-actin 一抗孵育,PBST洗涤,二抗孵育,洗涤,之后同法ECL后在Las-4000 Luminescent image analyzer上显影观察,发现什么东西也没有。
是膜防止时间太长,还是β-actin 一抗及二抗有问题,或是什么原因。
我不知道怎么办,现在写论文要用,难道重新做。