小中大请教老师:
现在在验证Y2H的诱饵蛋白在酵母中是否能够融合表达。做了两次,都只有空载的带(所以裂蛋白方法应该没有问题)。第一次上样15ul,曝了5分钟,只有空载的条带。第二次加大上样量,1.5的胶板上样40ul,曝光了8分钟,在72kd处隐约有很细的带,但空载泳道在此地方也有条断断续续隐约的条带,所以怀疑是非特异的,不是我的目的条带。
WB的条件是转膜100V 65min,5%脱脂奶粉封闭,一抗(myc-tag)1:1000,二抗1:10000。
下次准备提高下一抗稀释比例,再做看看。您觉得是WB的问题还是此基因在酵母中表达就不是很好,已经裂过三次蛋白了,每次表达量都不是很好。
谢谢`
=================================
先调整一抗浓度试试
有没有裂解酵母后的SDS-PAGE染色图片?