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标题:【讨论帖】western blot问题解答

redbutterfly[使用道具]
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你好,我做动物实验,比如我有3个组 正常、模型、治疗组,每组有10个样本,是这30个样本都要检测吗?谢谢!
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NBA[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2013-3-29 14:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你好,我做动物实验,比如我有3个组 正常、模型、治疗组,每组有10个样本,是这30个样本都要检测吗?谢谢!

每组检测3个就够了
最好检测6个
能10个都检测当然ok
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standbyme[使用道具]
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内参做的很好嘛?

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您好,这是Actin.做出来的结果,但是24KD没有曝出来。胶上面也没有染上色。


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2013-3-29 14:48
87584048.jpg (5.67 KB)
 
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tangxin_80[使用道具]
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用的什么loading啊?

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用的碧云天的5X上样缓冲液,昨天改了电泳液后好了,可能是之前电泳液配不好了··谢谢老师
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8princess8[使用道具]
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您好,这是Actin.做出来的结果,但是24KD没有曝出来。胶上面也没有染上色。

===============================================

我和你一样,内参做出来,分子量是27的一直没有做出来!
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ending[使用道具]
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首先非常感谢楼主,开贴
想问下上样缓冲液有多种,任选一种对结果影响大吗,我准备做个分之量265的蛋白,还有就是不同的电泳及转膜缓冲液是否对结果也有很大影响?谢谢
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1.我今天用您说的<湿转,300mA 恒流,40KD,30-40min>,我转了40min,转膜之后缓冲液很烫,虽然我也用冰浴,而且转移槽里还放了冰袋,温度这么烫对蛋白有影响吗?
2.我的marker转的很不好,最近经常碰到,marker转过后不是直线(横向的单个marker的线条),单个的marker它会往上翘又往下去,一头变粗,要不就是好几个marker都模糊成一条纵向的带,这个是什么问题啊,

2 转膜之前电泳后是直的,也很好看,但是转膜之后就不行了,就是我上面说的情况,有查到说是新海绵会出现marker转的不好,但是我的是旧的海绵啊,不知道为什么

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这个海绵是哪里的?
用之前泡了吗?
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NBA[使用道具]
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您好,这是Actin.做出来的结果,但是24KD没有曝出来。胶上面也没有染上色。

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从WB结果及SDS-PAGE染胶图来看,样品处理的可能性较大
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NBA[使用道具]
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首先非常感谢楼主,开贴
想问下上样缓冲液有多种,任选一种对结果影响大吗,我准备做个分之量265的蛋白,还有就是不同的电泳及转膜缓冲液是否对结果也有很大影响?谢谢

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主要看这个蛋白抗体的相关说明
如果没有特殊说明的话
用还原型的上样缓冲液
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大尾巴[使用道具]
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从WB结果及SDS-PAGE染胶图来看,样品处理的可能性较大

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您好,您能说具体一点吗?

样品处理可能存在什么问题呢? 是Sample buffer的问题? 还是什么问题呢?

那么要怎么解决呢?

还要请教老师一个问题,您做过关于RhoA的WB吗?它是磷酸化蛋白吗?
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