小中大大家好，我是用的抗体是CST（9664）的cleaved caspase-3（17/19kD），没做出来。这个抗体不检测未活化caspase-3（35kD）
组织：新生6天SD大鼠脑海马组织的，提取的是全蛋白，储存-80的；
上样量：为60微克/lane；10%的胶（细胞色素C14kD跑出来了，但cleaved caspase-3没出来）
电泳参数：浓缩胶60v、30min，分离胶120v、60min；
转膜（半干转）：恒流转，按照1mA/cm2（我同时跑的两块胶，胶总面积为16.6cm2，所以我转膜的电流为16mA），时间按照分子量定（1min/kD），选择了19min
封闭：5%脱脂牛奶封闭1小时
一抗：5%脱脂牛奶稀释（1:1000），摇床上摇1h，4度过夜
二抗：5%脱脂牛奶稀释（1:2000），摇床上摇1h
洗膜：PBST洗10min*3遍
显色：ECL显色
注：1.同样的胶和转膜方法， 同时做的细胞色素C（14kD）就做出来了，不过信号也不是很强。
2.β-actin也全部做出来的，不知道为什么就是cleaved caspase-3出不来，
实验老是做不出来，也怕被怕被老板说，着急啊
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请问，我上面的步骤有问题吗？非常感谢~~~~
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新生6天SD大鼠脑海马组织为什么会表达cleaved caspase-3？有细胞凋亡吗？
