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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-6-28 11:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳缓冲液的pH值应该是多少呢？
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-6-28 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Tris-Gly缓冲液pH值为8.3。

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电泳缓冲液的pH值应该是多少呢？
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发表于 2013-6-28 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
缓冲液相通了，电流就不会从胶中通过，类似短路。胶底的气泡可以先放外槽缓冲液，然后把内槽倾斜的缓慢放入外槽中。如果胶底有气泡，在左右大幅度轻微晃动，气泡就会跑出来，这时再加内槽缓冲液。屡试不爽。

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请教一个超傻问题，内外槽的电泳缓冲液不能相通吧？
还有胶底的气泡如何驱赶啊
我怎么总是赶不清？
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发表于 2013-6-28 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
具体描述一下，不知道是怎样情况。

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我的sds又出现了油状条带，不知道他影不影响蛋白电泳！！
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-6-28 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为你现在工作的焦点是怎样解决样品很粘的问题，即使不是电泳，以后要纯化的话，也必须降低粘度。

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to 小蚂哥：我的目的蛋白分子量大约40多kd，不是很大。因为我的菌发酵液就很粘，用肉眼都能看出来的。我的蛋白用pbs溶起来也是粘稠状的，而且我问一个其它实验室的师姐她也说是因为粘，她说少上样也就是让样的浓度尽量大些，体积小点。可是我做了少时能跑下来但没有带，同样的比例多一些就跑得慢跟marker比。怎么办呢？谢谢！！
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发表于 2013-6-28 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道是不是因为浓缩胶没凝好（但是等了近1个小时应该凝固了），拔梳子时会把样品槽拔坏，连续好几次了，很郁闷，请教解决办法
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发表于 2013-6-28 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

AP是否新鲜配置，如果下次怕拔坏梳子，尽可能早内槽倒满缓冲液再拔梳子。

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不知道是不是因为浓缩胶没凝好（但是等了近1个小时应该凝固了），拔梳子时会把样品槽拔坏，连续好几次了，很郁闷，请教解决办法
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guagua[使用道具]
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发表于 2013-6-28 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的蛋白是170kD，老是分子量不对，想换一个marker（以前用的是invitrogen的SeeBlue Plus2 Pre-stained standard），大家能给我一个建议吗？谢谢！
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发表于 2013-6-28 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 guagua 于 2013-6-28 13:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的蛋白是170kD，老是分子量不对，想换一个marker（以前用的是invitrogen的SeeBlue Plus2 Pre-stained standard），大家能给我一个建议吗？谢谢！

根据你的蛋白大小，应该使用高分子量Marker，最大分子量为200KDa的那种，你以前用的是预染Marker吧，我个人使用的感觉预染的marker没有原始的Marker好。上海生工所的还可以，我一直在用。
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发表于 2013-6-28 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fei1226com 于 2013-6-28 13:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


根据你的蛋白大小，应该使用高分子量Marker，最大分子量为200KDa的那种，你以前用的是预染Marker吧，我个人使用的感觉预染的marker没有原始的Marker好。上海生工所的还可以，我一直在用。 ...

谢谢解答！我还没有用过没预染的marker，请问原始marker如何在膜上看到条带呀？能否在这里给我们新手解释一下如何做？非常感谢！
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