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标题:【讨论帖】SDS-PAGE电泳求助专用帖

DDD[使用道具]
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为什么我的提取液能够测到蛋白浓度,却跑不出电泳???急
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QUOTE:
原帖由 DDD 于 2013-6-28 13:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
为什么我的提取液能够测到蛋白浓度,却跑不出电泳???急

原因有多种。
1. 蛋白虽有,但浓度不够;
2. 蛋白的分子量与跑胶的条件之间不合适;如果不是SDS-PAGE,电荷或分子形状对电泳结果的影响不容忽视;
3. 蛋白比较特殊,个别蛋白SDS处理不能改变其结构;
4. 也有的蛋白对常规的染色剂不着色;
5. 你测蛋白是用什么方法?杂质是不是对结果有干扰?
6. 你的提取液是什么?离子强度、缓冲系统对电泳结果是否有干扰?
等等
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ukonptp[使用道具]
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请教楼主:我的实验预测应该只有一条带,但几次跑浓缩胶的时候就没压成一条带,最后跑出来像apoptosis ladder一样,很多条,而且粗细基本一致。浓缩胶电压60V,电泳液是新配的,上样量25ug.

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从您的电泳条带来看,可能样品中有大颗粒物质,建议上样前离心。
条带未浓缩好,可能是您的凝胶缓冲液有问题,建议调整pH试试,浓缩胶pH6.8,分离胶pH8.9
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我是新新手,有很多问题跟大家请教! 我要分析的是一种废液里的蛋白,包括蛋白的等电点、蛋白的种类(有哪些)、蛋白的分子量,应该怎样设计试验呢?跑电泳的蛋白样品要很纯才行么?里面有纤维或脂肪、糖之类的东西可以么?
买回来的SDS需要重结晶 么?
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ukonptp[使用道具]
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sds-page就是变性电泳

===========================================================================================================

不是的,由于还原SDS-PAGE电泳比较常用,大多数情况下,我们可以狭义的认为SDS-PAGE电泳就是指变性电泳,但事实上它还包括非还原SDS-PAGE电泳,就是上样BUFFER中不加还原剂(DTT或巯基乙醇),只加SDS处理,其与还原电泳的区别就是未完全破坏蛋白分子的高级结构,而只是打开了其中的氢键。对于一些大分子物质可以保持蛋白分子的完整性。
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zzzz[使用道具]
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请问楼主,我前天跑的电泳出现了一个特别怪的事情:我的marker在压线条带之前也出现了一个蓝色条带,不知道为什么?我以前做得都很好,问同学也都没有见过这个现象。
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ukonptp[使用道具]
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我的marker在压线条带之前也出现了一个蓝色条带,不知道为什么?

====================================================================

能说的明白点吗?比如带的位置,只marker有吗?是偶然还是每次都这样?影响实验结果吗?
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yueban-1147[使用道具]
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Smearing can have a variety of causes, but most commonly it is due to an unevenly poured acrylamide mixture or due to gross overloading of protein.


In this example the gel was not properly poured, so that the lower half had begun to polymerize before the upper part was poured. The first gel mix began to polymerize too quickly. Rather than prepare a new gel cassette, the students simply stopped pouring, prepared a new mix, and poured it on top of the old. Obviously, the bond wasn't particularly good.

不知这有无帮助


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2013-6-28 13:41
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多糖可以做SDS-PAGE吗?我看有做细菌脂多糖的PAGE,染色用银染,那么细菌的荚膜多糖可以做SDS-PAGE吗?
谢谢!
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DDD[使用道具]
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请问楼主:
在样品提取时加入尿素的目的是什么?加和不加跑出的带有什么不同?
多谢!
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