蛋白质与蛋白组学

我的目的蛋白不是二十几，我的蛋白是五六十KD的，但是我觉得我的二十几的marker 不能跑下来的话，我的蛋白就不能保证完全跑开。
不是分子量越小，应该跑更大浓度的胶吗？

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不知道你是用多大的分离胶来跑的，从你描述的现象来看，应该是蛋白分子量大小与分离胶的浓度不相适应造成的。

请教一下

日前做western，66kd的蛋白，用的5%浓缩胶，12%的分离胶，电泳80～120V，2.5小时，转膜是用的半干法，电流＝膜长度（cm）*膜宽度（cm）*1.56
，时间1小时。但是结果不理想，估计是转膜的问题，请问用什么样的转膜条件比较合适呢？

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转膜出现了什么问题呢？说的详细一点，看看能不能帮上您。

我用的就是15%的胶阿。我的分离胶上是有跑过的痕迹的，但是就是没有条带。我现在觉得问题就是出在电泳条件和样品上。我每次只跑2h,恒流20mA是否有可能多肽已经跑出去了？
如果真是被降解了，应该加什么样的蛋白酶抑制剂？主要是以前没做过蛋白

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看看溴芬兰是否跑出去了呢？其分子量要比你的目标蛋白小，保证他没跑出去，应该没有问题的。可能的话，把你图贴上来看看。

谢谢各位的建议：
1 浓度问题：我想应该不是。我冻干后用500ul的水溶（过去至少5毫升，BCA法测蛋白浓度是400ug/ml），取了30ul上样。
2 样品处理问题：我是煮沸3分钟，加了10ul的上样缓冲液，离心（10000rpm 3分钟）后上样
3 小蚁个问的问题：我是由海洋动物中提取的蛋白，是用50%的丙酮沉淀出来的，然后用PBS 复溶的。然后再上SEPHADEX G-75，分离的不同峰。然后再跑电泳。
我想其中应该有多种蛋白啊，分子量也就无法判断了！
望各位再帮忙！

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400ug/ml是层析前的浓度还是层析后的浓度？