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我也在做pET28a表达,若测序正确,我觉得你应该检查一下你的loading buffer,因pET28a在37度表达量是很大,易形成包涵体,而loading buffer在低温条件下SDS会析出,如未混匀就吸取上清的话,loading buffer中因无SDS而难以溶解包涵体,经离心后包涵体会沉淀至管底,上清电泳就无法检出表达的目的蛋白了.如样品沸水煮后离心之后管底的沉淀明显多于空白对照则十有八九是形成包涵体而loading buffer中无SDS所致.另外沸水煮的时间长一点,如15-20分钟试试!
仅供参考!!