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标题:【求助】请教蛋白质疏水层析

dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加土温肯定要比不加洗脱彻底,而且也许可以避免沉淀,你样品疏水性强可以适当增加洗脱液中PEG浓度,这样肯定会不一样的,而且可以避免沉淀.至于后面的不清楚你说的是什么意思.
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biabiade[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚才，我把加土温和不加土温的洗脱液离心，结果加土温比不加土温的少。土温影响蛋白质活性？1]
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发表于 2014-7-8 10:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

什么少,沉淀少还是活性少,本身不影响活性但是也许干扰活性测定,你可以加PEG试试,不一定非要土温
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发表于 2014-7-8 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加土温比不加土温的10mMTris-cl洗脱液离心，沉淀少。但是刚才我用50%乙酸调加土温的洗脱液到PH4.0，搅拌大概半小时，然后离心，沉淀量稍多点。PEG用多大分子量的？
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
沉淀少那就对了,PEG你可以选择小分子量的如400-600,也可以选择5000左右,自己定,因为这和样品有关.
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biabiade[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这和样品有关，这怎样讲？为何调PH，沉淀稍多点？我是开发药得，不是写论文，所以我要确定所加的土温，PEG能够到最后纯品时能够完全除掉，因为每一种药都有质量标准，产品都有一定配方，土温多了会造成溶血。
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发表于 2014-7-8 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同pH下蛋白溶解度不同,自然沉淀不一样,如果觉得吐温不保险,可以加PEG,最后不需要除去,具体该怎么做关键看你自己的要求,PEG过柱子可以除去,例如离子交换,凝胶等.
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发表于 2014-7-8 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天做了一次，结果很理想，我的样品先调到PH8.5，然后用10mM醋酸缓冲液（PH4.0）+硫酸铵洗脱，逐渐减低硫酸铵浓度洗脱，再用10mM醋酸缓冲液（PH4.0）洗脱，蛋白洗不下来，最后用10mM醋酸缓冲液（PH4.0）+1%土温洗脱，能够洗下来，洗下来的溶液很透明，无沉淀，这样，我直接可过CM柱了，这样解决了调PH造成沉淀。如果CM柱能够把土温去掉，那这样就成功，最后就是活性了，如果活性没影响，就很好。在此还的感谢你的指点！
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

别客气，肯定能去掉吐温。但是我建议你用PEG，因为它本身还可以保护蛋白活性，当然没时间那就算了。
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biabiade[使用道具]
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发表于 2014-7-8 10:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
土温影响CM柱对蛋白的吸附？
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