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标题:【求助】T4 DNA Ligase 连接时间

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-8-27 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该恭喜你，我载体一直构建不出来。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-8-27 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的不是T载体构建，就是常规的酶切，连接，一直没成功。目前还没找到原因。
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-8-27 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2014-8-27 10:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的不是T载体构建，就是常规的酶切，连接，一直没成功。目前还没找到原因。

你是用什么酶做的连接
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baidukk[使用道具]
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发表于 2014-8-27 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

T载体本来也就不到5K的大小吧，连4K的片段进去很难的，所以效率低是很正常的，这不算是什么问题吧~
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-8-27 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yhz1973 于 2014-8-27 10:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你是用什么酶做的连接

确实是这样，我这几天连的2k多的片段就挺好的，4k多的就不行了，不知道有什么适合长片段的载体
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-8-27 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NEB T4连接酶。今天测序结果刚回来，貌似不理想，还再DNAman中。。。

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我用的也是这个酶，如果你的测序结果不理想的话应该是PCR的原因吧，可以试试高保真酶
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