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标题:【求助】单抗的糖型分析，液相有响应而液质联用无响应...

koook5695[使用道具]
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发表于 2014-8-29 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】单抗的糖型分析，液相有响应而液质联用无响应...

最近在做单抗糖型分析实验，经2-AB衍生后，经液相分离后，用荧光检测器分析图谱正常。
打算用液质联用对各峰进行定性，但是送过去测，说质谱完全无响应。
在此求助高人解答，万分感谢！
上质谱的话是不是还需要注意些别的什么，我们是送出去测的，质谱上的东西我不太了解。液质联用的话还用2-AB衍生吗？还有那人说100mM甲酸铵的盐浓度太高了，上不了质谱，让我降到10mM，是这么回事吗？
还是因为我的样品浓度不够？我在荧光上检测响应值是30mV左右。
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发表于 2014-8-29 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谈两点经验
1.液相的信号太低了，可以试着加大信号量
2.最重要的是最好把样品脱一下盐，再去送质谱
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-8-29 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谈两点经验
1.液相的信号太低了，可以试着加大信号量
2.最重要的是最好把样品脱一下盐，再去送质谱
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-8-29 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

100mM甲酸铵是流动相吗？甲酸铵有离子抑制作用，可降低离子化效率
样品中有去污剂吗？去污剂也会降低离子化效率
换家公司试试
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-8-29 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

您好，
首先，2AB标记后是通过荧光检测的，灵敏度高，再由于寡糖类的离子化效率差，因此质谱信号相对较低。
其次，质谱对于盐是比较敏感的，应该考虑降低盐浓度。
方便说一下您是送到哪做的吗？
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发表于 2014-8-29 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2014-8-29 14:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您好，
首先，2AB标记后是通过荧光检测的，灵敏度高，再由于寡糖类的离子化效率差，因此质谱信号相对较低。
其次，质谱对于盐是比较敏感的，应该考虑降低盐浓度。
方便说一下您是送到哪做的吗？ ...

您好，我是送到我们学校其他实验室做的，我是中国药科大学的。请问要上lc-ms的话是不是不用荧光标记了？我怕荧光标记和纯化步骤会有影响，所以想省去此步，可以吗？
谢谢！
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发表于 2014-8-29 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2014-8-29 14:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您好，
首先，2AB标记后是通过荧光检测的，灵敏度高，再由于寡糖类的离子化效率差，因此质谱信号相对较低。
其次，质谱对于盐是比较敏感的，应该考虑降低盐浓度。
方便说一下您是送到哪做的吗？ ...


不标记的话在正离子模式更难离子化，可以试试负离子模式，我没有试过，也不知道怎么样，呵呵
我们倒是试过直接在糖肽层次上做，不需要切糖衍生，效果也不错
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feima+[使用道具]
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发表于 2014-8-29 14:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 TNT 于 2014-8-29 14:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


不标记的话在正离子模式更难离子化，可以试试负离子模式，我没有试过，也不知道怎么样，呵呵
我们倒是试过直接在糖肽层次上做，不需要切糖衍生，效果也不错 ...

非常正确。
但是，糖肽分析不如寡糖分析灵敏度高。所以一般还是2AB标记寡糖分析比较经典。
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feima+[使用道具]
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发表于 2014-8-29 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 feima+ 于 2014-8-29 14:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


非常正确。
但是，糖肽分析不如寡糖分析灵敏度高。所以一般还是2AB标记寡糖分析比较经典。

糖肽的优势是可以获得位点的信息,也可以初步分析一下难分析的O糖型
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feima+[使用道具]
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发表于 2014-8-29 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
质谱的液相分离，是HILIC吗？流动降低盐浓度，甚至可以不加甲酸铵，直接用0.1% Formic Acid。有一张比较图，洗脱时间稍有提前。

抗体上的几种寡糖大都是中性糖，带电能力差，不易离子化。离子化条件需要优化，尤其是温度，寡糖链比较不稳定，容易断裂。
还有，可能质谱TIC上看不到什么信号，但如果去找相应洗脱时间寡糖的一级质谱图或者XIC，应该能找到相关糖型的离子峰。
有条件的话，试试2AA标记（prozyme有卖的），使寡糖带酸性基团，尝试用负离子模式质谱检测。
附waters的糖型分析PPT cuturl('http://d.dxy.cn/detail/6063185')，希望有所帮助。


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2014-8-29 14:54
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