小中大【求助】色谱峰总有前延,峰形不正
今天做HPLC,样品峰形不正太,起初以为是杂质,用梯度分离,不好使;后来再进一针标准品,发现标准品的峰形依然不好。开始排查原因:
1. 起初流动相加了0.8%冰醋酸, 考虑是否是酸性不够,改为0.8%甲酸,峰形依然没有改变;
2. 考虑是否柱效不行,换了一根柱子;冒险把柱子反冲一次,峰形依然没有改变;
3. 进样阀用甲醇清洗,作用不大;
4. 进针色谱甲醇,用甲醇溶解的样品,看了下吸收度,认为基线基本没有变化;
5. 流动相把甲醇换成乙腈,峰形还是没有变化;
6. 把0.8%冰醋酸流动相,换成纯水峰形还是没有变化;
另外,这根柱子、色谱条件和液相一个月前测这个样品峰形还非常好,最近搬了一次校区再用就不好了,非常奇怪。
明天,把这根柱子换到另一台液相上再试试,再认真清理下进样阀,看看结果吧,实验太揪心!!!
跟大家请教下还有什么方面没有注意到,需要处理下???