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标题:【求助】 PCR结果只有引物二聚体

toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
网上好像是有看过加甘油的..加的量是多少？
我是跟师姐做的，哈哈..她好像不太推荐太小的体系..
哦哦哦..我是引物没融全就把加了...
“取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的”有试过这个方法吗？
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
er..我们实验室买的酶都是mix的..-0-..
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misswu61[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #12 toy 的帖子

不至于吧？1uL而已......
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 misswu61 于 2015-1-14 15:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不至于吧？1uL而已......

我们用的mix的，是加总体系的一半....-0-....
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ALALA[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这应该跟体系的大小没有关系哦，可能是溶解不完全或者酶出来问题吧。
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #15 ALALA 的帖子

恩恩，我也觉得...我觉得貌似是引物都自己连接了..有没什么可行的方法？网上看过一些...但是有些方法好像有点囧...-0-
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发表于 2015-1-14 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
甘油的话，用100ul的枪，好吧，我们叫枪，一般可加5管，一管一滴。至于你说的那种方法，我没试过。体系么，可能每个实验室的习惯不一样吧。P.S：PCR的过程有时候让人又爱又恨的，这很正常，耐心点，good luck~
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nut6694[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你再认真看看了，做实验细节至关重要了。如果再做还是那样的效果，那也只能死马当活马医了。
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那加的还挺多的啊..唉..今天还是做不出..明天试试那个方法好了...-0-...我的酶啊....两只都没多少了...上次p了个1500bp的也p得shi去活来的...
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toy[使用道具]
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发表于 2015-1-14 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
和以前没什么区别，今天还做了两个梯度的..结果都没出.....还是只有又粗又亮的引物二聚体...这死马要怎么医...-0-...
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