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标题:【讨论帖】制备色谱技术与操作

3N4G[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢？TFA的浓度越高基线的漂移越厉害，那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢？
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发表于 2015-4-21 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 3N4G 于 2015-4-21 15:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
TFA在缓冲液中是不是只起到调节pH的作用呢？TFA的浓度越高基线的漂移越厉害，那是不是说它的浓度在缓冲液pH允许的情况下越低越好呢？

（1）TFA起到类似离子对的作用，一般浓度在0.05-0.1%，过高的浓度，会使溶液偏酸，长时间使用可能影响柱子寿命。
（2）同时TFA可以抑制硅胶表面硅醇基，改善碱性化合物的峰型。有时0.1%TFA分离不好的话。可以考虑加大浓度到0.2%。但要注意用完后及时冲洗色谱柱。
（3）走梯度时，因为走成基线漂移，但对制备的影响不大。
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okhaha[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？
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发表于 2015-4-21 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 okhaha 于 2015-4-21 15:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
样品如果溶解度太低如何上制备HPLC？

（1） 了解一下样品的性质,根据其酸碱性,极性等性质，通过调节溶剂的pH值等, 以达到较好的溶解度
（2）样品可能某种晶型难溶，这样可以加入其他溶剂（如丙酮等）以助溶。
（3）不是一定要用流动相来溶解样品，对溶解度差的样品，可以选择甲醇，THF或DMSO等溶解样品。特别是DMSO，对一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不会造成干扰。而且DMSO的洗脱能力很弱，一般不会影响峰型。
（4） 可以固体上样。
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langlang[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多肽的分离制备, 如何上量？如何增大分离度?
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发表于 2015-4-21 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 langlang 于 2015-4-21 15:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
多肽的分离制备, 如何上量？如何增大分离度?

反相HPLC应当是很好的分离小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流动相，看保留如何，若无保留，建议改用其他色谱方法进行分离。
关于多肽的分离，首先要知道它的分子量大小，然后选择不同类型的填料，如孔径的大小。我们先在分析柱（4.6MM内径）上做一下实验,找到最大的分离度,这一过程的难度是最大的,要不断地改变流动相和固定相,然后再线性或非线性放大到制备,放大的倍数按分析柱的实验结果。分离后可以通过冷冻干燥得到固体。
还可以考虑离子交换来分离多肽。
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babybabe[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做柱层析时（国产大孔吸附树脂），怎么才能把洗脱液中的树脂残留物处理干净？
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发表于 2015-4-21 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 babybabe 于 2015-4-21 15:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
做柱层析时（国产大孔吸附树脂），怎么才能把洗脱液中的树脂残留物处理干净？

大孔吸附树脂在上使用前，一般需要进行处理，方法包括用色谱纯的甲醇或乙睛洗到没有吸收；或树脂用乙醇浸泡2天，丙酮浸泡2天，然后用常规的酸，碱洗。再用丙酮回流二小时就可以用了。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
由分析型液相转为制备型液相，其色谱系统需作多大调整？是否可以按照柱体积折算只改变流速？其上样量多大为宜？
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发表于 2015-4-21 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 qqq111 于 2015-4-21 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
由分析型液相转为制备型液相，其色谱系统需作多大调整？是否可以按照柱体积折算只改变流速？其上样量多大为宜？

（1）泵要换，流量要加大，压力可不变或减少；流通池要换体积更大的。
（2）整个系统的管路要更换更粗的，否则压力太大,而且特别容易发生堵塞。对流通池后的管路，最好增加反压调节器，否则管路太短的话，反压小会导致流通池气泡，管路长的话会导致峰展宽。
（3）检测器的响应时间和峰宽要设置合适，否则会导致收集时延迟体积的计算不准
(4)上样量主要根据柱子的大小、样品的浓度、制备是否根据分析条件放大（例如制备柱是否还用分析用填料）；一般上样量与柱子直径的平方以及长度成正比。
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