一种基于抗原抗体反应的免疫分析技术——RIA

生物药物分析可以检测和研究各种生物药物的质量,放射性免疫分析(RIA)生物药物分析的一种方法。该方法以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量,常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定,特别适用于激素、多肽等含量微少物质的超微量分析。

ELISA生物药物分析的一种方法,是免疫分析领域较为通用的分析方法,此方法是以酶标抗原或酶标抗体为主要试剂,通过复合物中的酶催化底物呈色而对被测物进行定性或定量的标记免疫技术,具有操作简单、快速、灵敏、经济并且适用于批量处理等优点。

不同于ELISA,放射性免疫分析技术使用放射性同位素标记抗原或者抗体,通过反应物的分离和放射信号的检测实现对样本的分析。但 RIA 技术存在同位素信号衰减的问题,同时检测过程中可对人体造成伤害,因此该技术现已较少应用。我们来看一下RIA的主要步骤有哪些。

(1)抗原抗体反应

  根据RIA原理,将未标记抗原(标准品和待测样品)、标记抗原和特异性抗体加入反应试管中,在一定条件(温度、时间及介质pH)下进行竞争抑制反应。

 (2)分离结合与游离标志物

  RIA反应平衡后,标记抗原与试剂抗体形成免疫复合物(B)。由于其含量极少,不能自行沉淀,因此需加入适当的沉淀剂才能将其彻底沉淀,然后经离心使其与游离的标记抗原(F)分离。某些小分子抗原也可采用吸附法分离BF

(3)放射性测量及数据处理

  分离BF后,即可对标记抗原抗体复合物(B)进行放射性测量,也可根据RIA实验方法及目的,测定游离标记抗原(F)。绘制标准曲线(剂量-反应曲线),样品管以其测量或计算的反应参数, 通过标准曲线即可查出相应的待检抗原浓度,目前已普遍采用计算机进行数据处理、自动绘制标准曲线和打印样品抗原浓度。

放射免疫分析方法虽然操作简便、成本低,在70年代末达到高峰,但是由于其具有放射性、难储存及难以自动化检测等缺陷,因而使用受限,并于70年代末开始衰落和取代。然而目前还没有一种免疫分析技术是完美无缺的,各种技术还需要不断发展和完善,以开发出更新,更理想的免疫分析技术。美迪西生物技术药物分析部门拥SpectraMaxM4/M5/i3x, MSD, Luminex, Biacore 8K, Envision, GyrolabABI7500 qPCR等全方位多功能的技术平台,利用LIMS系统实施全面的实验室信息化管理,提供全面符合FDA/CFDA/OECD GLP规范要求的生物技术药物分析服务。