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标题:[求助]培养基中有大量黑色小点，疑似支原体污染

tuomu45[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]培养基中有大量黑色小点，疑似支原体污染



最近养细胞两次碰到图中这种情况，400倍镜下能看到密密麻麻的小黑点悬浮在培养基中，扭动、转动，或无规则的运动，少的时候细胞还能生长，多到厚厚一层时，细胞贴壁就不牢固了，轻轻吹打就会浮起。培养箱中摞在一起的培养皿中渐渐都被污染了，呈蔓延态势，而隔开一段距离放置的却没有此现象。常见的抗生素对它不管用。

我认为这是支原体污染，不知同行是怎么看的？培养箱是否需要立即灭菌呢？是环境的问题还是细胞中潜伏有它？有什么简单易行的方法摆脱困境吗？
就应为这个，实验的连贯性和真实性被破坏了，好多数据都不能采用，苦恼......


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2012-3-21 16:43
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发表于 2012-3-21 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得还是细菌污染，支原体很小的，一般显微镜看不到，而且一般的抗生素也对它有作用，培养箱灭菌，然后重新复苏
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支原体400倍能看的这么清楚么... 不大像。

还有不要单纯的以为加了抗生素就能瞬间的把大量细菌全部杀掉。在细菌未成规模的时候，加抗生素会有明显效果。等它成了规模了，你再加基本也就没什么用了。过段时间细菌又会长满了。到这时候如果不是什么珍贵的细胞，还是放弃重新复苏一管吧。
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发表于 2012-3-21 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我负责任地告诉楼主。就是支原体污染。我测过序。你买plasmocin或BMcyclin用有效。

你看到的黑点不是一个支原体，而是一群支原体与biofilm及细胞碎片的混合物。
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不用担心，可能是消化过度了，留下的细胞碎片。我每次消化过度是都有看到这样的小黑点，每次换液用PBS冲一下就好了，大概2天就没有了。我试过的，还可以。
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发表于 2012-3-21 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上怎么解释做原代细胞，即使不消化也出现小黑点。
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原代细胞才容易出现这样的问题吗？我最近也在养原代细胞，连续两次出现污染，青链霉素加了的也没有用。
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，你养的是什么细胞
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tuomu45[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的C3A也会有这种情况，也是镜下有很多小黑点，肉眼看培养基有许多悬浮物，不知道这是细菌污染还是支原体。
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tuomu45[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

周末时发现细胞悬浮增多，贴壁不牢，并且小黑点开始增多，我先是怀疑是细菌污染，于是按照园子里推荐的方法即用PBS洗几次然后在培养瓶中加青链霉素，可是过了18小时发现细胞悬浮还是处于增多趋势，我觉得不像是简单的细菌污染。哪位师兄师姐也碰到过类似的情况，拜求解释！
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