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标题:[讨论帖]细胞培养基础器材和试剂选择与购买

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[讨论帖]细胞培养基础器材和试剂选择与购买



发起细胞培养常用器材与试剂选择与购买话题,在自己搜集学习的过程中自己也学习到很多。总结了一些非常基础的东西,以及一些群友们可能会忽视的问题,与大家共同学习。
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一、细胞培养基础器材与试剂购买之细胞培养环境
其实这些对于有层流条件的战友是废话。但就我所知,国内有这样条件的还是少数,大部分战友的培养细胞条件非常的简陋。当然细胞培养的环境是越干净越好,很多实验室都是一个小屋子里放着一台超净工作台,四周不透风,这样的结果有两个:1、人非常的难受(特别是在照完紫外灯之后)2、细胞污染的几率加大(在这样空气不循环的条件下,超净工作台的工作负荷会加大),其实超净工作台的工作原理非常的简单,就是上面多了个过滤空气的纱网,空气不循环的条件下空气会非常的浑浊,纱网的洁净功能寿命会明显缩短,所以如果是这样条件的话,最好开一个排风扇,在上面安装一个过滤空气的纱网,这样会减少上述情况的发生。很多情况下发生污染我们都不知道是怎么回事,试着检查一下是不是这些细节出了问题吧
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二、细胞培养基础器材与试剂选择与购买之培养箱与超净工作台
细胞培养肯定离不开这两样东西,我谈谈对两种仪器的简单看法。国内与国外的很多厂家都生产二氧化碳培养箱,就不一一列举了。在这里我建议各位战友如果要购买培养箱的话还是考虑国外的,不是我不支持民族企业,我们前后买过几个培养箱,国产的寿命平均不到两年,其中还来来回回修过很多次。国外的厂家我推荐Termor公司的和日本ESPEC公司的,这两家的培养箱质量都不错。
二氧化碳培养箱从加热装置来看分为气用型与水用型的。气用型的特点:加热快,散热快。水用型的特点:加热慢,散热慢。水用型的加满水大概需要加50公斤的水(搬起来能把人累死),加满之后3-5年不需要再加水。
园子里很多战友对培养箱的消毒都有自己不同的方法,很多战友喜欢用甲醛之类的来熏蒸,这里我建议大家不要采取这样的方法,培养箱的二氧化碳探头是一个非常灵敏的器械,这个器械在37℃和饱和湿度的空气中才是准确的。由于我国诸如电压会不稳定等问题,一个不稳定脉冲的冲击下,二氧化碳探头长时间就会形成一种错乱,表现是显示为5%的CO2,但其实是已经明显高于5%或者明显低于5%, CO2在很短时间内就用完或者培养液颜色老是偏碱。这个时候,就需要我们对培养箱进行一次CO2校正。不同的培养箱校正指示不一样,在这里不再论述。经常用有机溶剂进行熏蒸的话,使得这个探头的灵敏度大大下降。最好的办法就是用75%的酒精溶液充分地擦洗。(个人浅见,欢迎各位战友拍砖)
这些仪器的购买不是我们这些实验在第一线的人说了算的,既然买了我们就要维护。最主要的维护就是定期要换洗超净台上的过滤纱网,不要用酒精擦拭有机玻璃挡板等。套用一句热播电视剧的台词:既然没办法改变结果,就完善过程吧。
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三、细胞培养基础器材与试剂购买之培养瓶,培养板,滴管
生产细胞培养瓶、培养板的厂家不计其数,我不可能将其一一列出,在这里,我简单介绍一下这些细胞培养瓶的大小与我们平常实验的关系。
从大小来讲,细胞培养瓶约可分为约600ml,250ml,50ml和25ml的,一般都经过表面改性处理,适合细胞贴壁和生长。600ml 、300ml的多用于大规模培养时用(如单克隆细胞的培养等),50ml的多用于一般性细胞实验用(一般性的传代,保存细胞,为实验提供细胞等),25ml一般是用来复苏细胞或细胞较少时的培养,还有做原代细胞时也可以做多瓶而避免交叉污染。当然还有其他如圆形的等,都可根据个人爱好和实验需要自己选择。


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根据细胞培养瓶制作材料的不同,也有玻璃和塑料之分,这里谈一点自己的浅见(欢迎不同意见的战友拍砖)。不同的细胞对胰酶的敏感度不一样,所以在实验中我们常常会遇到一些细胞消化半天也没有起色,导致细胞状态不断下滑,直至最后的死亡以至于实验进展的不顺利。当然,有时候是可以通过加一些EDTA等来增强胰酶的能力,或者提高胰酶的浓度来实现,在培养一些细胞过程中,我发现,一些细胞对玻璃和塑料制品粘附能力不同,如RAW264.7,平滑肌细胞等,在转换培养瓶之后,可以发现好消化了很多,并且在回到原制品的培养瓶时不会改变它的贴壁能力。这里希望有经验的战友可以分享你们的经验。


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图中我们看到塞子有所不同,因为有些规格的培养瓶瓶口不是螺帽形状,所以只能通过图中的方法进行,但是这样会有一个弊病就是二氧化碳培养箱基本起不到调节pH的作用了,所以这种情况一般用于较皮实的细胞的培养,如HepG-2,HeLa等等。
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关于培养板的购买其实我也没有什么经验,想说的就是要尽量避免购买国产的培养板,国产的一些培养瓶还可以,但是培养板我们买过很多国产的,确实效果不是很好,细胞在里面基本上长的非常非常磕碜。所以经费富余的情况下,这些东西能买进口的就买吧。大公司的基本都可以买,BD,Corning等等。这些东西原则上是一次性的,但是我们大部分实验室根本不可能做到,其实泡酸,洗干净再用也没问题,毕竟我们没有老外那么富足的经费,所以我们就累点吧,多做点体力活锻炼一下身体吧。
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滴管其实也没什么好说的,国产的就足够了。要说的是图中我比较喜欢用C类的滴管,原因就是塞上棉花后吹打细胞不会怕棉花湿掉而引起污染,而且用完棉花也方便取出,便于下次再用。


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细胞培养的基础器材和试剂很多,胰酶,EDTA,具体到各个实验就更多,筛选用的G418,侵袭迁移用的Transwell小室等,刺激细胞生长的PHA,ConA,IL等等,希望有经验的各位战友将自己购买的性价比高的器材,试剂等(什么牌子等),加上自己使用的宝贵经验等,为新战友少走一些弯路尽自己绵薄之力吧!
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这个问题嘛
是否什么东西都是一分钱一分货呢?
我一直都是用的GIBCO的胎牛血清,小牛血清,培养基,非必须氨基酸,G418,0.25%胰酶EDTA;corning细胞培养瓶,培养板(有时候也用国产的玻璃瓶)
HYCLONE的培养基也曾经用过

GIBCO配好的胰酶非常能放,刚开始还怕4°放久了活性变差,每30ml分装,现在基本上时100ml分装,因为我发觉他的胰酶在4°放上2-3个月还是很猛。

总之GIBCO的东西确实很好用。不差钱,选择GIBCO不会错
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