小中大[求助]细胞RAW264.7培养中,黑色游走的小虫...
细胞培养近半年了,也曾遇到这样的问题,近来发现的细胞中有一种黑色的线条状小虫非常的猖狂,使得细胞培养进行不下去了(附图), 长短不一,在细胞培养液中游动,随着细胞培养时间的延长,他会增长繁殖,多的时候看上去黑压压一片像个毛团团,长的比较长的游动起来很像蝌蚪,尾巴是摆动的,可以从视野的一端游动道另一端去,这些小虫子是什么?哪里来的?怎么避免他们的出现??
有说是黑胶虫的,但是黑胶虫是个什么东西,这真的是吗?应该不是细菌污染,因为培养基的颜色不会变的那么黄,而且细菌污染会有难闻的气味,这个没有怪味
我对此采取了如下措施,以期找到他的来龙去脉:
1.首先,细胞培养箱进行的彻底的清理,换了新的空气过滤器,全部清理了一遍(原来的培养箱的滤器里面藏了那么多的脏东西,脏死了,全部用酒精棉擦了,臭氧发生器熏了)
2..排除培养液、完全培养液、血清的问题 跟培养细胞同时操作的 同时放入到培养箱中培养,观察同时进行
之前的一瓶血清,在进行上述操作的时候被发现 也会张这样的小虫子,被我停用了,换了新的血清,放到培养箱中养了3天了,未出现这样的小虫!
细胞培养的操作问题、细胞所用的一切用具,我自以为没有大的问题】
问题排除了差不多的时候我开始复苏细胞,复苏3瓶(不同时间冻存的)
一瓶第一天就出现小虫了(复苏细胞时,我只加了基础培养液1640,血清都没加,因为我们冻存细胞用了血清:DSMO=9;1)
另外两瓶生长非常好,但是在今天传代一次,共8瓶细胞全部长满了小虫子。而其他的血清、完培,基培都是正常的
我要哭了,折腾这么久了,问题排查也拍不出来了,我不知道还能是什么原因?只能怀疑到细胞本身的问题了,,细胞本身问题到也不那么可怕买就是了,就怕不是细胞本身的问题到时候买来新的细胞在给养成这样子,那要怎么交代哦,老板会骂死我的,那位高手,救救我吧!谢谢你了!