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标题:[求助]帮忙看一张流式图

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]帮忙看一张流式图



流式细胞仪 测量 大鼠外周血淋巴细胞 的CD3-CD4;CD3-CD8
这是结果。

取材没问题，抗体没问题，

但是，最后得出的百分比太低了。

什么原因呢？


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2012-3-22 14:21
27392567.snap.jpg (38.6 KB)
 
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gogo[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

门设错了,是那位天才设的门?
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
外周血是如何处理的？
直接破红还是Ficoll密度梯度离心？
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发表于 2012-3-22 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

门里面可能是红细胞
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思 我看了这图后 完全不清楚里面的数据代表什么呢?能详细说说吗?如UL UR LL LR及Events gated
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也觉得是gate的位置错了，而且FSC-SSC的图信号设置的不好，我觉得应该再把FSC信号再提高一点，然后选择大一些的细胞，现在的细胞太小了（就像上面说的，红细胞可能性比较大，如果是事实，那看来是没有去除红细胞？至少用裂解液之类的稍微去以下比较好吧？）

另外FL1和FL2也可以适当再提高一点，然后把补偿调的合适就好

祝好运！
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969[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也觉得是门设错了，有没有经过erythrolysis？
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
门也不是说设错，是设的范围太大了。不过从FSC－SSC散点图看，标本质量也不怎么样，细胞分群不理想。所以，我建议你一方面注意一下标本质量，另一方面注意一下设门。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也不是说设错，是设的范围太大了。不过从FSC－SSC散点图看，标本质量也不怎么样，细胞分群不理想。所以，我建议你一方面注意一下标本质量，另一方面注意一下设门。

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++

我想问一下，怎么提高标本质量呢？

我现在的步骤是：取血；加抗体；加全血；避光孵育；红细胞裂解液；离心；PBS冲洗；上机
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junhun[使用道具]
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发表于 2012-3-22 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

直接破红处理也未偿不可，但是你的红细胞碎片要尽量去除干净，否则流式图会非常难看。但是，红细胞碎片并不是很容易去除，所以一般情况下还是建议用Ficoll密度梯度离心法处理外周血，得到PBMC后再标记抗体上流式分析。另外，直接破红处理时加抗体也是在破红之后，而不是直接加到全血内后再破红。
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